Colloque

Développement et application de la technique de PCR à l'ANF

Christophe Sola

Marc Cantin

Chantal Mercure

Membre a labase

Christophe Sola

Résumé du colloque

La technique de PCR a été appliquée à la détection des ARN messagers codant pour le facteur neurotrophique des oreillettes (ANF). Quatre primers, choisis pour amplifier 446 et 396 paires de base respectivement du cDNA-ANF de lapin et de rat ont été synthétisés. Leur spécificité ainsi que les conditions expérimentales optimales d'amplification ont été déterminées sur des dilutions d'un plasmide qui contient le cDNA-ANF de rat. La réaction de PCR a ensuite été effectuée sur un aliquot de cDNA de ventricules et d'oreillettes de lapin. Après électrophorèse sur gel d'agarose à 2%, d'un aliquot de réaction, nous visualisons directement par fluorescence aux ultraviolets en présence de bromure d'éthidium, un fragment de taille égale à celle du fragment théoriquement amplifié dans les échantillons correspondant au cDNA des oreillettes. La spécificité de l'amplification est confirmée par hybridation et par coupure spécifique avec une enzyme de restriction. Nous appliquons cette technique à la mise en évidence des ARN messagers ANF sur divers microprélevements et corrélons ces études avec la localisation cellulaire de ces ARN par hybridation in situ avec des sondes cRNA.

Contexte

Section :

Biologie moléculaire

Thème du colloque :

Biologie moléculaire

Hôte : Université du Québec à Montréal

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Titre du colloque :

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