Colloque

Effet d'une séquence d'ADN satellite humain sur l'expression de gènes électroporés

Djenann Saint-Dic

Michael Scott Dubow

Membre a labase

Djenann Saint-Dic

Résumé du colloque

Le génome des eucaryotes possède de nombreuses séquences répétitives d'ADN. Les séquences les plus répétitives se retrouvent au niveau de l'hétérochromatine constitutive, plus précisément au centromère. L'ADN satellite simple (ADNsat) constitue de 5 à 10% du génome humain et correspond à une classe d'ADN hautement répétitif. Cet ADNsat est composé de séquences uniques courtes qui s'enchaînent les unes après les autres pour ainsi former de très longues séquences. Bien que quelques rôles aient été proposés pour l'ADN satellite, sa fonction précise reste encore à déterminer. Notre but est d'acquérir une meilleure compréhension du mode d'action de l'ADN satellite. Dans cet optique, notre laboratoire a caractérisé une séquence d'ADNsat humain de 1.797 kb. Cet ADNsat a été inséré à différentes positions dans un vecteur possédant un gène de la thymidine kinase (tk) de HSV-1 et un gène de résistance à la néomycine (neo). L'électroporation de cellules humaines AK143B (tk-, G418s) avec ces différents plasmides a démontré que lorsque l'ADNsat est inséré à l'opposé du gène tk, ce dernier empêche l'obtention de colonies tk+/G418r. Le même effet a été observé lorsque de plus petits fragments (0.797 kb et 1 kb) sont insérés à la même position. Il semble donc que l'ADNsat empêche l'intégration et/ou l'expression des gènes tk et/ou neo. Cependant en réduisant encore plus la longueur de l'ADNsat, le nombre de colonies obtenues suivant l'électroporation s'est accru, ce qui porte à croire que la longueur minimale d'ADNsat qui exerce l'effet négatif a été identifiée. L'expression à court terme des gènes tk et neo suivant l'électroporation ne semble pas être affectée comme l'a démontré l'hybridation d'ARN. Des expériences sont en cours pour analyser les sites d'intégration des gènes, au niveau chromosomique, suivant l'électroporation.