Communication

Élaboration d'un nouveau système d'expression en vue d'augmenter la production d'anticorps recombinants par les cellules eucaryotes

Marie-Ève Habel

Mathieu Drouin

Daniel Jung

Membre a labase

Marie-Ève Habel

Résumé de la communication

L’élaboration de lignées cellulaires sécrétant de hauts niveaux d’anticorps recombinants est souvent une tâche ardue due à l’instabilité génétique des transfectants. Pour contrer ce problème, nous avons élaboré et évalué divers systèmes d’expression reposant sur l’utilisation d’un vecteur épisomal dérivé de EBV (pCEP4) et d’un vecteur bicistronique dérivé de ECMV (pIRES), en fonction de leur capacité à augmenter la stabilité et le niveau d’expression d’anticorps recombinants chez certains types d’hybridomes murins. Les ADNc de la chaîne lourde et légère de l’anticorps p3-17, un IgG humain anti-D, ont été clonés dans le vecteur bicistronic pIRES. Ce vecteur contient une cassette d’expression dans laquelle 2 ORFs sont séparés par une région IRES (internal ribosome entery site). Cette cassette bicistronique fut ensuite clonée dans le vecteur épisomal pCEP4. Cette construction finale bicistronique/épisomale de p3-17 (p3-17bi/pCEP4) fut ensuite transfectée dans les lignées cellulaires de types Sp2 EBNA-1 (+/-). L’analyse du niveau de sécrétion d’anticorps fut effectuée par ELISA. Il fut démontré que la génération d’un seul ARNm bicistronique contenant les deux régions codantes de p3-17 séparées par un site IRES permet l’isolation plus rapide des clones exprimant de hauts niveaux d’anticorps recombinants ainsi que des rendements en chaînes légère et lourde presque équivalents, ce qui n’avait pu être aussi rapidement obtenus par aucun autre système d’expression à doubles vecteurs. Le système épisomal laisse entrevoir un plus fort rendement en anticorps que les systèmes intégrés et ce grâce à la possibilité d’obtenir plusieurs copies du plasmides par cellules sans que la stabilité génétique des transfectants ne soit compromise.

Contexte

Section :

Microbiologie, virologie et immunologie

Domaine de la communication :

Microbiologie, virologie et immunologie

Hôte : Université Laval

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