Colloque

Étude de l'expression de l'ORF563 du génome chloroplastique de Chlamydomonas moewusii

Patrick Nédélec

Guy Bellemare

Membre a labase

Patrick Nédélec

Résumé du colloque

Nous avons caractérisé à partir d'un clone chloroplastique de Chlamydomonas moewusii (pCMEA) la présence de RNA messagers dont l'expression est régulée par la lumière. Ce clone est contenu entre un cadre de lecture ouvert de 563 acides aminés (ORF563). Cette séquence est homologue à 89% en acides aminés avec l'ORF513 de Marchantia polymorpha. Un sous-clonage dans le vecteur pT7PGC nous a permis de placer l'ORF563 en phase avec le promoteur TAC. Des études de croissance bactérienne et un marquage in vivo à la méthionine 35S ont été effectués. Un sous-clonage dans le vecteur pGEX-3X nous a conduit à synthétiser, in vivo, chez Escherichia coli une protéine de fusion avec l'enzyme Glutathion-S-transférase (gène provenant du parasite Helminthes Schistosoma japonicum). La protéine recombinante obtenue a été purifiée par chromatographie d'affinité (Sepharose4B glutathione). Des anticorps dirigés contre la protéine de fusion ont été produits chez le lapin. L'étude de l'expression de l'ORF563 (par transfert de type "western" d'échantillons protéiques de cellules de C. moewusii et C. eugametos), en fonction des différents stades du cycle cellulaire, nous permet de confirmer la régulation par le cycle lumineux de la synthèse de cette protéine.

Contexte

Section :

Biologie moléculaire

Thème du colloque :

Biologie moléculaire

Hôte : Université de Sherbrooke

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Titre du colloque :

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