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Étude des facteurs se liant à la séquence de type MAR du promoteur du gène BnC1 de Brassica napus

France Bégin
Guy Bellemare
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France Bégin

Résumé du colloque

L’expression d’un transgène chez les plantes transformées génétiquement est très variable d’un transformant à l’autre. Cette variabilité résulte en partie de la structure de la région où est intégré le transgène. Un transgène peut dans certaines conditions voir sa transcription inhibée ou activée. Ce phénomène est désigné sous le terme “effet de position”. Il a été démontré que l’effet de position est atténué lorsque que le transgène se trouve flanqué de séquences d’ADN distinctes qu’on appelle les séquences MAR (“Matrix Attachment Region” ou région se liant à la matrice nucléaire). Ces séquences MAR jouent donc un rôle primordial dans la stabilité de l’expression du transgène d’intérêt. Nos travaux antérieurs ont démontré qu'il existe une séquence de type MAR dans la région activatrice du promoteur du gène de la cruciférine BnC1 de Brassica napus. Il a été démontré en retardement sur gel qu’il existait des protéines nucléaires solubles de Brassica napus qui se lient à cette région. Étant donné l’importance biologique de ces séquences, l'intérêt a été porté sur la caractérisation des protéines qui interagissent avec les régions MAR. Une banque d’ADNc de graines immatures de Brassica napus a été criblée dans un système de levure à un hybride pour isoler des protéines qui interagissent avec cette région du promoteur du gène BnC1. La séquence en acides aminés d'un des clones qui ont été isolés par ce criblage présente une homologie avec la protéine humaine HMG-1. Les protéines HMG ("high mobility group") sont des protéines nucléaires qui reconnaissent les séquences riches en A/T présentes dans les régions MAR. L'ADNc du clone a été inséré dans un système d’expression chez E. coli afin de produire et de purifier la protéine recombinante. Cette protéine sera utilisée dans des études d'interactions ADN-protéines par gel de retardement. La production d'anticorps polyclonaux spécifiques à notre protéine recombinante permettra de confirmer par super-retardement ("supershift") que les protéines se liant à la région MAR dans des extraits nucléaires de B.napus sont des HMGs.

Contexte

Section :
Biologie et génétique moléculaires
news icon Thème du colloque :
Biologie et génétique moléculaires
manager icon Responsables :
Rémy Aubin
host icon Hôte : Université d’Ottawa

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Titre du colloque :

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