Colloque

Étude des interactions protéine-protéine fonctionnelles entre partenaires tronqués de la protéine homéodomaine BnHD1

Hélène Rocheleau

Guy Bellemare

Membre a labase

Hélène Rocheleau

Résumé du colloque

Le gène BnHD1 (Brassica napus Homeodomain 1) appartient à la grande famille des Homéodomaines, des facteurs de transcription essentiels aux processus du développement et de différenciation cellulaire chez bon nombre d'organismes. La protéine BnHD1 fait partie d'une super-classe de protéines homéodomaines appelée TALE "Three Amino Acids Loop Extension". Ces protéines TALEs dérivant d'un ancêtre commun, le répresseur homéodomaine MATalpha2 de la levure se caractérisent par la conservation de trois résidus d'acides aminés surnuméraires dans le domaine de fixation à l'ADN. La protéine BnHD1 avec sept autres analogues de plante se regroupent à l'intérieur d'une sous-famille que l'on appelle KNOX. Ceux-ci partagent quatre régions de fortes homologies: le domaine KNOX, la boîte GSE, le domaine ELK et le domaine de fixation à l'ADN ou domaine Homéo. Afin de mieux caractériser ces domaines du point de vue fonctionnel, nous avons construit deux versions tronquées de la protéine BnHD1: le délétant Homéo; HD1.d1 et le délétant Homéo-ELK; HD1.d2 en fusion au domaine de fixation à l'ADN (BD) et au domaine d'activation (AD) de GAL4 ceci, grâce aux deux vecteurs d'expression du système de deux hybrides de la levure (pAS2 et pGAD424 respectivement). Des essais in vivo visant à démontrer les interactions protéine-protéine fonctionnelles entre délétants ont pu être menés chez les doubles transformants de levure par la mesure de leur activité beta-galactosidase et de leur croissance sur milieu 3[AT]. Les résultats de ces essais démontrent que la version complète de BnHD1 (BD-HD1) est incapable d'activer la transcription avec aucun des partenaires tronqués (ni AD-HD1.d1 non plus que AD-HD1.d2). Contrairement à BD-HD1, la fusion BD-HD1.d1 forme un complexe d'activation transcriptionnelle avec AD-HD1.d1 et AD-HD1.d2. Par ailleurs, chez le simple transformant exprimant la fusion BD-HD1.d1, une activité beta-galactosidase quoique plus réduite est observée. Ceci suggère que la perte de l'homéodomaine modifie de façon appréciable la structure globale de la protéine par l'exposition des régions impliquées dans l'homodimérisation. D'autre part, on peut facilement présumer que l'homodimère fonctionnel BD-HD1.d1 favorise l'activation de la transcription en se fixant directement à l'appareil de base ou indirectement via la fixation d'un cofacteur endogène. Par ces résultats, il est permis de conclure que la protéine homéodomaine BnHD1 forme des homodimères fonctionnels en absence du domaine de fixation à l'ADN et que ces domaines d'homodimérisation se trouvent situés du côté N-terminal soit en amont du domaine ELK. Nous explorons actuellement les autres régions (le domaine Knox et la boîte GSE) avec d'autres combinaisons de partenaires tronqués afin de mieux définir les frontières de ces domaines conservés et leur implication respective dans le processus d'oligomérisation et de transactivation.

Contexte

Section :

Biologie et génétique moléculaires

Thème du colloque :

Biologie et génétique moléculaires

Responsables :

Rémy Aubin

Hôte : Université d’Ottawa

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