Colloque

Étude du site de liaison du substrat stéroïde de la 17β-hydroxystéroïde déshydrogénase par mutagénèse dirigée

C. Manin

J.C. Fontecilla-Camps

R. Breton

J.Z. Jin

S.X. Lin

Membre a labase

C. Manin

Résumé du colloque

La 17β-hydroxystéroïde déshydrogénase (17β-HSD) intervient dans la biosynthèse des hormones stéroïdes actives qui stimulent les cancers hormone-dépendants. Le clonage et l'expression de l'enzyme nous ont permis de produire de grandes quantités d'inhibiteurs puissants et spécifiques. Nous avons amorcé une étude sur la fonction conformationnelle du site de liaison du substrat par mutagénèse dirigée aux acides. Trois résidus d'histidine (H221; F214 et H222), identifiés par des marquages d'affinité, comme faisant partie du site de liaison du substrat, ont été mutés en alanine. Des mutants H222-->Q (1) et H222-->Q (2) ont été exprimés dans le système baculovirus, purifiés et leur activité enzymatique mesurée. L'activité enzymatique des mutants H221-->Q et F214-->Q a été mesurée après purification. La mutation de H221 en Q diminue l'activité enzymatique de 20% pour le mutant 1 et de 45% pour le mutant 2. Par ailleurs, la coopérativité négative normalement observée entre les deux sous-unités de l'enzyme sauvage n'est plus visible, dans les mêmes conditions, pour les mutants H221-->Q et F214-->Q bien qu'aucunement les mutants 1 et 2 pour le mutant H222-->Q (1). L'évaluation des constantes de Michaelis pour l'oestradiol laisse apparaître pour ces mutants un comportement du mutant 2 KmQ de l'enzyme sauvage (Km1=27 nM, Km2=13 μM). L'H222 pourrait intervenir dans l'étape de liaison réversible du substrat stéroïde. Des cristaux ont été obtenus pour ces mutants et l'étude cristallographique est en cours.

Contexte

Section :

Biochimie, biologie moléculaire

Thème du colloque :

Biochimie, biologie moléculaire

Hôte : Université du Québec à Montréal

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Titre du colloque :

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