Colloque

Étude d'un déphasage programmé du cadre de lecture des RNA messagers dans un système procaryote

Marie-Noëlle Brunelle

Lea Brakier-Gingras

Membre a labase

Marie-Noëlle Brunelle

Résumé du colloque

Le déphasage programmé du cadre de lecture d'un RNA messager (mRNA) est un mécanisme essentiel pour la production de la protéine gag-pol, le précurseur des protéines enzymatiques du VIH (virus de l'immunodéficience humaine). Lors de ce déphasage, il y a glissement des ribosomes dans un nouveau cadre de lecture au niveau d'une séquence glissante spécifique du mRNA. Nous avons voulu étudier ce déphasage du cadre de lecture dans un système procaryote. Une cassette de DNA codant pour la séquence glissante du RNA du VIH suivie d'une structure stimulatrice en tige-boucle a été insérée au début de la séquence codante de deux gènes rapporteurs, ceux de la chloramphénicol acétyl transférase (CAT) et de la luciférase de la mouche à feu (LUC). Les constructions sont telles que seuls les ribosomes qui effectuent le changement programmé du cadre de lecture produisent la protéine CAT ou LUC. Les gènes de ces protéines, placés sous le contrôle d'un promoteur T7, ont été transcrits in vitro par la T7 RNA polymérase, et les messagers correspondants ont été traduits dans un extrait bactérien (un surnageant S30 d'E. coli) en présence de différents inhibiteurs de la synthèse protéique. Les protéines CAT et LUC étaient quantifiées après traduction en présence de [35S]méthionine par une électrophorèse suivie d'une autoradiographie, et soit par "western blot" pour CAT, soit par un test d'activité enzymatique pour LUC. Des constructions témoins, où la production de CAT et LUC ne nécessite pas de déphasage, étaient examinées simultanément. Nos résultats indiquent que le déphasage programmé observé chez le VIH peut être reproduit dans un système procaryote in vitro, et suggèrent que le glissement des ribosomes dans un nouveau cadre de lecture a lieu avant l'occupation du site A par l'aminoacyl tRNA.