Colloque

Études des interactions 17β-HSD-ligands à l'aide de sondes de fluorescence

Arezki Azzi

Sheng-Xiang Lin

Membre a labase

Arezki Azzi

Résumé du colloque

La 17β-Hydroxysteroïde déshydrogénase (17β-HSD) présente dans la fraction soluble du placenta humain catalyse l'inter-conversion de l'estrone en estradiol en présence de NAD+ ou NADP+. Nous avons rapporté récemment la purification des formes holoenzyme (avec NADP+) et apoenzyme de la 17β-HSD. Afin d'étudier les interactions enzyme-ligands par les méthodes fluorométriques, nous avons étudié les interactions entre la forme apoenzyme de la 17β-HSD et les conjugués d'aniline, acide sulfonique et de toluidinylnaphtalène chloré qui sont des sondes de fluorescence. Nos résultats montrent que ces composés se lient uniquement aux régions hydrophobes de la 17β-HSD et stimulent la fluorescence de l'enzyme à divers degrés d'intensité. Avec le 6-p-toluidinylnaphtalène-2-sulfonate (6.2 NS) on observe une augmentation de l'intensité de fluorescence de 993 fois. La constante de dissociation du complexe 6.2 TNS-17β-HSD est 33 μM. Les études de liaison de la 17β-HSD avec ses cofacteurs et substrats ont été réalisées par la méthode de titration de fluorescence. Suite à la liaison avec ces cofacteurs et substrats, il se produit un "quenching" de la fluorescence résultant d'un changement conformationnel de la protéine. On observe un comportement allostérique de coopérativité négative, au cours de la liaison de la 17β-HSD avec le NADP+, avec deux sites de fixation distincts. Le NADP+ serait donc impliqué dans le mécanisme de régulation de la 17β-HSD.

Contexte

Section :

Biochimie, biologie moléculaire

Thème du colloque :

Biochimie, biologie moléculaire

Hôte : Université du Québec à Montréal

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Titre du colloque :

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