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Études structure-fonction de la 17ß-HSD estrogénique : spécificité des divers substrats dont l’estrone, l'estradiol, le DHEA, le DHT et le 20alpha-hydroxyprogestérone

Anne Gangloff
Sheng-Xiang Lin
Qing Han
Robert Campbell
AG

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Anne Gangloff

Résumé du colloque

La 17ß-hydroxystéroide déshydrogénase estrogénique humaine (17ß-HSD1) est responsable de la dernière étape de formation de tous les estrogènes actifs, ceux-ci impliqués dans la prolifération des cellules cancéreuses du sein. Afin de mieux comprendre le mécanisme de réaction de la 17ß-HSD1, nous avons effectués les travaux suivants: dans un premier temps, nous avons déterminé les constantes cinétiques (Km, Kcat...) de la 17ß-HSD1 à 37°C dans un tampon phosphate à pH 7.5 afin de reproduire le mieux possible les conditions physiologiques. L’activité du type 1 fut testée pour les substrats suivants: 20 alpha-hydroxyprogestérone, DHT, DHEA, estradiol et estrone. Nous avons obtenus les valeurs préliminaires de Km et d’activités suivantes: 12µM et 0,07 U/mg pour le 20alpha-hydroxyprogestérone, 20µM et 0,14 U/mg pour le DHT, 12 µM et 0,21 U/mg pour le DHEA, 0,03µM et 2,3 U/mg pour l’estrone. L’enzyme utilisée est cristallisable et fut purifiée à partir de placentas. Ensuite nous avons comparé les résultats cinétiques obtenus avec la structure des complexes de la 17ß-HSD1 avec différents stéroides, on arrive à des résultats cohérents qui se confirment mutuellement. La présence du méthyle en position 19 du DHEA semble produire de l’encombrement stérique dans le site actif, tel que nous le montre la structure. Le fait que l’on observe une nette augmentation du Km du DHEA par rapport au Km de l’estrone appui cette observation. Certaines observations nous indiquent les acides aminés impliqués dans la discrimination entre les androgènes et les estrogenes. Le but de cette comparaison est de mieux comprendre les diverses interactions enzyme-substrat et de quantifier l’effet de ses interactions sur l’activité enzymatique. La compréhension de ses interactions permettra le design d’inhibiteurs spécifiques qui éventuellement pourront être utilisés pour bloquer la 17ß-HSD1, diminuant les niveaux d’estrogènes actifs disponibles.

Contexte

Section :
Biochimie et biologie structurale
news icon Thème du colloque :
Biochimie et biologie structurale
manager icon Responsables :
Michel Guertin
host icon Hôte : Université Laval

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Titre du colloque :

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