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Évaluation de la mesure du calcium intracellulaire dans les cellules leucémiques B humaines par cytométrie en flux à l'aide des sondes fluo-3 et SNARF-1 combinées

Édouard Kouassi
Éric Archambault
Chantal Baron
ÉK

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Édouard Kouassi

Résumé du colloque

Le calcium intracellulaire ([Ca++]i) est un messager important dans la transduction des signaux dans les lymphocytes B. La mesure de ce messager est facilitée en cytométrie en flux par le développement d'une sonde très sensible, le fluo-3, qui est excitable dans le visible (488 nm), et qui émet à 525 nm. Son spectre d'excitation ou d'émission ne varie pas après liaison de Ca++, ce qui ne permet pas de maîtriser les variations liées aux concentrations relatives de sondes dans chaque cellule. Pour pallier ce désavantage, on peut théoriquement utiliser le rapport du signal fluo-3 sur celui d'une autre sonde, le SNARF-1 qui ne lie pas Ca++ et qui émet à 610 nm. Cette méthode ayant été proposée pour mesurer [Ca++]i dans les lymphocytes normaux ou du sang périphérique humain, nous avons évalué son utilisation sur les lignées leucémiques B humaines, de façon à déterminer si le comportement de ces deux sondes est identique. Les cellules sont chargées avec les deux sondes en utilisant un ionophore de calcium, le ionomycine. Les signaux fluo-3 (F1) et SNARF-1 (F1-F2), ainsi que le rapport F1/F1-F2 sont mesurés par cytométrie en flux. Les résultats montrent qu'en l'absence de stimulation, le signal basal de fluo-3 reste stable dans le temps, alors que celui SNARF-1 diminue considérablement, suggérant que SNARF-1 ne se comporte pas de la même façon que fluo-3 dans les cellules leucémiques B.

Contexte

Section :
Pharmacologie
news icon Thème du colloque :
Pharmacologie
host icon Hôte : Université du Québec à Montréal

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Titre du colloque :

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