pen icon Colloque
quote

Évaluation de l'activité de clivage et d'intégration de l'intégrase du VIH-1 obtenue par surexpression dans Escherichia coli

Khampoune Sayasith
Jocelyn Yelle
Gilles Sauvé
KS

Membre a labase

Khampoune Sayasith

Résumé du colloque

À ce jour, plusieurs millions de personnes sont atteintes du SIDA et l'utilisation de drogues anti-VIH telles que l'AZT, la ddI et la ddC pour bloquer la transcriptase inverse s'avère problématique à cause de leur toxicité et de l'apparition de souches virales résistantes aux traitements. Il devient donc nécessaire de cibler de nouvelles enzymes essentielles du virus comme l'intégrase (IN), pour développer de nouveaux agents thérapeutiques. L'IN est encodé par l'extrémité 3' du gène pol. Elle joue une activité endonucléase et une activité d'intégration du génome proviral dans le génome de la cellule-hôte. Dans le but de développer de nouveaux agents anti-VIH, nous avons préparé trois constructions du gène codant pour l'IN dans le plasmide pET-16b et l'enzyme a été exprimée dans les bactéries E. coli BL21(DE3)pLysS. L'enzyme a été purifiée par chromatographie d'affinité et analysée par SDS-PAGE et Western blot. L'activité enzymatique a été évaluée en présence d'un substrat synthétique marqué représentant la partie US du LTR viral. La détection des produits de clivage et d'intégration a été faite sur des autoradiogrammes de polyacrylamide et autoradiographie. Différents paramètres ont également été vérifiés pour optimiser la réaction. En utilisant ces trois constructions l'IN sont actives et ce, même en présence d'acides aminés supplémentaires N-terminal. La détection des produits de clivage s'est révélée plus simple à effectuer que celle des produits d'intégration. Les conditions optimales de réaction obtenues par cette méthode de dosage serviront de guide pour mettre au point des inhibiteurs de l'IN ou pour développer d'autres tests enzymatiques spécifiques de l'IN.

Contexte

Section :
Biochimie, biologie moléculaire
news icon Thème du colloque :
Biochimie, biologie moléculaire
host icon Hôte : Université du Québec à Chicoutimi

Découvrez d'autres communications scientifiques

news icon

Titre du colloque :

Biochimie, biologie moléculaire
Effets du benzo-a-pyrène et de la cyclophosphamide sur l'intégration du rétrovirus Cas-Br-E au locu…
Monique Chardola
Production et évaluation de l'activité biologique de l'acide oxo-5-éicosatétraénoïque (5-KETO)
Jean-Pierre Falgueryet
Expression de la molécule d'adhésion intercellulaire-1: rôle de la poly (ADP-ribose) polymérase
Nathalie Malenfant
Voir tous les contenus de ce colloque

Autres communications du même congressiste :

news icon

Thème du colloque :

Biochimie, biologie moléculaire
Évaluation du taux d'insertion d'un substrat dans une cible plasmidique par l'intégrase du VIH-1, g…
Khampoune Sayasith
Évaluation du taux d'insertion d'un substrat dans une cible plasmidique par l'intégrase du VIH-1, g…
Khampoune Sayasith
Évaluation du taux d'insertion d'un substrat dans une cible plasmidique par l'intégrase du VIH-1, g…
Khampoune Sayasith