Colloque

Évaluation du taux d'insertion d'un substrat dans une cible plasmidique par l'intégrase du VIH-1, grâce à un nouveau test d'activité

Khampoune Sayasith

Jocelyn Yelle

Jeannot Lettre

Gilles Sauvé

Membre a labase

Khampoune Sayasith

Résumé du colloque

L'intégrase du virus du SIDA, le VIH, est une enzyme qui assure l'insertion du provirus dans l'ADN des cellules infectées de façon aléatoire. Cette enzyme possède deux activités distinctes principales, l'une de clivage du substrat et l'autre d'intégration du substrat dans une molécule cible d'ADN. Les tests utilisés actuellement pour étudier l'activité d'intégration de l'enzyme virale sont très limités en général et ne reflètent pas vraiment ce qui se produit avec le substrat naturel. Nous avons donc mis au point un nouveau test plus représentatif de cette activité. Dans ce test, un substrat constitué d'un gène de résistance à l'antibiotique zéocine (InVitrogen) flanqué de séquences reconnues par l'intégrase du VIH-1 est incubé avec l'enzyme et une cible constituée du plasmide pT7T3a18 (GIBCO/BRL). Le mélange est utilisé pour transformer des bactéries qui sont ensuite ensemencées en milieu sélectif. Nous avons utilisé ce test pour déterminer de façon quantitative l'efficacité de l'intégrase à insérer un substrat dans une cible d'ADN. Ce test très simple sera d'une grande utilité pour étudier le mécanisme d'action de l'intégrase et évaluer des inhibiteurs potentiels.

Contexte

Section :

Biologie cellulaire et moléculaire

Thème du colloque :

Biologie cellulaire et moléculaire

Hôte : Université McGill

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Titre du colloque :

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