Communication

Exploration de la spécificité de substrat des glycosides hydrolases du clan GH-A

Nabil Masri

Claude Dupont

Membre a labase

Nabil Masri

Résumé de la communication

Les glycosides hydrolases sont des enzymes hydrolysant les liens glycosidiques contenus entre des unités saccharidiques ou entre une unité saccharidique et un groupement aglycone. La classification de ces enzymes se fait en familles et en clans dans lesquels on retrouve des enzymes ayant une structure tertiaire similaire, un même mécanisme d'hydrolyse, mais une spécificité de substrat qui peut être très variée. Le clan GH-A est le plus diversifié des 11 clans existants. En tout, 28 spécificités de substrat y sont dénombrées malgré un repliement commun de type (bêta/alpha)8. Afin d’identifier les éléments structuraux gouvernant la spécificité de substrat des enzymes du clan GH-A, la structure tridimensionnelle de la xylanase A de Streptomyces lividans a été superposée par modélisation moléculaire avec les autres structures disponibles de ce clan. De là, des acides aminés potentiellement impliqués dans la spécificité de substrat ont été identifiés. Quatre mutations (V202F, T235G, D238G et R275A) ont été introduites par PCR dans le gène de la xylanase A de S. lividans et les gènes résultants ont été exprimés chez S. lividans. Après purification, les enzymes mutantes ont été comparées à l’enzyme sauvage au niveau de la dénaturation thermique, du patron d’hydrolyse, analysé par chromatographie à échange d’anions, ainsi que de l’activité spécifique envers différents substrats. Ces techniques ont permis de déterminer que deux des mutants sont plus spécifiques que l’enzyme sauvage pour des substrats contenants du mannose ou du galactose dans leur chaîne principale.

Contexte

Section :

Biochimie, biologies cellulaire et moléculaire

Domaine de la communication :

Biochimie, biologies cellulaire et moléculaire

Hôte : Université Laval

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Thème du communication :

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