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Expression bactérienne du marqueur B, un facteur surexprimé chez les patients souffrant d'anémie hémolytique

Annie Lacerte
Eveline De Medicis
Christine Gagnon
AL

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Annie Lacerte

Résumé de la communication

Les patients souffrant d'anémie hémolytique ont une plus grande quantité de précurseurs érythroïdes dans le sang. Cette propriété constitue un critère de sélection des gènes de la lignée érythroïde. Parmi ceux-ci, le marqueur B(MB GenBank 64701)est une séquence codante de 451 pb dont la protéine correspondante est homologue à l'interféron alpha-A de boeuf (Larochelle, Marceau et de Médicis, J. Leukocyte Biol., 1994). MB a été exprimé dans un système bactérien dans le but de mesurer son activité biologique sur les cellules du sang et pour obtenir des anticorps polyclonaux chez le lapin. MB a été sous-cloné dans trois vecteurs différents. Dans pGEX-2TK (Pharmacia), la protéine de fusion avec la glutathion-S-transférase est obtenue en bonne quantité, purifiée sur colonne d'affinité au glutathion, mais le clivage à la thrombine ne s'effectue pas. Dans pMal-p2 (New England Biolabs), la protéine de fusion avec la protéine de liaison du maltose n'est pas sécrétée dans l'espace périplasmique, malgré le peptide signal, et elle est dégradée par les protéases intracellulaires. Dans pTcr-His(Invitrogen) la protéine de fusion avec le peptide poly-His est obtenue en faible quantité, purifiée sur colonne de ligand métallique et clivée avec l'entérokinase. Cette dernière préparation est utilisable pour l'immunisation de lapins et l'obtention d'anticorps anti-MB spécifiques.

Contexte

Section :
Biochimie, biologies cellulaire et moléculaire
news icon Domaine de la communication :
Biochimie, biologies cellulaire et moléculaire
host icon Hôte : Université de Montréal

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Thème du communication :

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