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Expression dans des hépatocytes de rats du gène humain du récepteur LDL transféré in vitro par l'intermédiaire de récepteurs hépatiques reconnaissant l'apoprotéine E

Hong Zheng
M. R. Ven Murthy
Pierre Julien
HZ

Membre a labase

Hong Zheng

Résumé du colloque

L'hypercholestérolémie familiale (HF) est une maladie autosomale souvent causée par une déficience en récepteurs hépatiques pour les lipoprotéines de basse densité (LDL). La fréquence pour la HF est très élevée dans plusieurs groupes ethniques, en particulier celui des Canadiens-Français du Québec. Le récepteur humain des LDL (LDLr) a été cloné dans le plasmide pcDNA3.1(+) contenant un promoteur CMV. Le plasmide recombinant (pcDNA-LDLr) a par la suite été lié à la lipofectine dans un rapport 1 : 6 (poids/poids). Dans une deuxième étape, le complexe DNA-lipofectine a été lié à l'apoprotéine E (apoE) dans un rapport variant de 1 à 10 µg d'apoE/µg de DNA. Le complexe résultant (pcDNA-LDLr+lipofectine+apoE) a ainsi été utilisé afin de transférer des gènes fonctionnels de LDLr à des hépatocytes par l'intermédiaire des récepteurs de l'apoE. L'expression des LDLr humains a été déterminée après différentes périodes de transfection par trois méthodes : (1) le "Northern blot" en utilisant le rRNA 28s comme standard interne; (2) le RT-PCR de l'ARNm du LDLr humain en utilisant l'ARNm du LDLr de rat comme standard interne endogène; (3) le RT-PCR de l'ARNm du LDLr humain en utilisant un fragment du cDNA du LDLr humain comme standard interne exogène. Un transfert de gènes relié à la concentration d'apoE a été observé. Le transfert du gène LDLr lié à la lipofectine avec une quantité optimale d'apoE (2µg d'apoE/µg de cDNA) a conduit à une plus grande transfection des hépatocytes par comparaison à la lipofectine seule. Par contre, nous avons aussi remarqué que des doses élevées d'apoE tendent à réduire l'efficacité de la transfection du gène qui est complète à l'intérieur d'une période de 8 à 16 heures.

Contexte

Section :
Biologie et génétique moléculaires
news icon Thème du colloque :
Biologie et génétique moléculaires
manager icon Responsables :
Louis Bernatchez
host icon Hôte : Université Laval

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Titre du colloque :

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