Colloque

Expression de la protéine sigma 3 de réovirus à partir du gène cloné

Josée Bergeron

Guy Lemay

Membre a labase

Josée Bergeron

Résumé du colloque

La protéine sigma3 codée par le gène S4 de réovirus est une métalloprotéine à zinc ayant de l'affinité pour l'ARN bicaténaire et constituant la protéine majeure de la capside externe. Plusieurs rôles ont été attribués à cette protéine au cours du cycle de multiplication viral. Notamment, elle serait responsable de la régulation de la synthèse protéique en séquestrant l'ARN bicaténaire activateur de la protéine kinase cellulaire ARN dépendante. Des travaux récents, effectués dans notre laboratoire, suggèrent aussi la présence de sigma3 dans le noyau des cellules infectées. Afin de continuer ces études, nous avons récemment établi une lignée de cellules de mammifères devant permettre le contrôle du niveau d'expression de la protéine à partir du gène cloné introduit dans ces cellules. Ce système, utilisant des éléments régulateurs de l'opéron tétracycline, nous a permis de détecter la production de la protéine sigma3 dans des cellules SC1 de souris transfectées avec un vecteur portant le gène S4 sous contrôle d'un promoteur approprié. Nous avons procédé à un marquage métabolique afin de détecter la production de protéine modulée par la présence de concentrations variables de tétracycline dans le milieu de culture, la protéine a ensuite été détectée par immunoprécipitation. Nous prévoyons maintenant utiliser ce système afin d'examiner plus en détail la localisation nucléaire de sigma3. De plus, nous examinerons aussi l'efficacité de la lignée à complémenter une souche virale thermosensible précédemment caractérisée au laboratoire. Cette souche possède une mutation rendant la protéine sigma3 non-fonctionnelle à température non-permissive ce qui empêche l'assemblage de virions matures. En parallèle, l’expression chez une levure méthylotrophe, Pichia pastoris, est également exploité. Ce système permettant la production de la protéine sous forme soluble et pouvant éventuellement être utilisé pour des études biochimiques.

Contexte

Section :

Biologie cellulaire et moléculaire

Thème du colloque :

Biologie cellulaire et moléculaire

Hôte : Université McGill

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Titre du colloque :

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