Colloque

Expression des domaines fonctionnels de la guanylate cyclase/récepteur de l'ANP chez E. Coli

Caroline Koch

Francis Bayard

Francis Gossard

Pavel Hamet

Johanne Tremblay

Membre a labase

Caroline Koch

Résumé du colloque

Objectif: Deux sous-types de récepteur pour l'ANP (ANPR-A et ANPR-B), protéines transmembranaires de 120-180 kDa possèdent une fonction guanylate cyclase (GC) intracellulaire. Nous avons caractérisé par la technique d'irradiation-inactivation trois domaines fonctionnels indépendants de 30, 20 et 90 kDa représentant les domaines catalytique, récepteur et régulateur de l'ANPR-A. Ceci suggère que l'ANPR-A fait partie de la famille des protéines à multiples domaines. Cette hypothèse a été testée en exprimant des fragments de différentes longueurs de cDNA codant pour la région intracellulaire de l'ANPR-A. Méthode: Le cDNA de l'ANPR-A fut cloné à partir de fragments obtenus par PCR. Une partie du cDNA fut insérée dans le vecteur pET11d de manière à exprimer une protéine de fusion chez E. Coli HMS 174. Les peptides synthétisés furent visualisés sur un SDS-PAGE et un test d'activité enzymatique spécifique aux peptides de fusion. La production de GMPc est mesurée par un RIA. Résultats: L'expression d'un peptide de 30 kDa représentant le domaine catalytique et d'un de 66 kDa correspondant à toute la région intracellulaire ont démontré une activité guanylate cyclase lors de l'essai enzymatique. L'expression d'une partie du cDNA de l'ANPR-A codant pour le domaine cyclase démontre que le peptide C-terminal d'environ 30 kDa est responsable de la fonction cyclase de l'ANPR-A. La caractérisation des domaines de l'ANPR-A est nécessaire à la compréhension de la régulation de son récepteur.

Contexte

Section :

Biologie cellulaire

Thème du colloque :

Biologie cellulaire

Hôte : Université de Montréal

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Titre du colloque :

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