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Expression du cotransporteur rénal Na+/proline dans les oocytes de Xenopus laevis injectés à l'ARNm

Hélène Gagné
Jean-Yves Lapointe
Alfred Berteloot
HG

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Hélène Gagné

Résumé du colloque

La caractérisation moléculaire des systèmes de transport des acides aminés s'est avérée jusqu'à maintenant impossible en raison des problèmes reliés à la purification de cette classe de protéines membranaires hautement hydrophobes et qui ne sont exprimées qu'en très faible quantité dans la cellule. Une nouvelle approche utilisant l'oocyte de Xenopus laevis comme vecteur d'expression permet de contourner ces difficultés. L'expression du cotransporteur rénal Na+/proline a été évaluée sur des oocytes injectés à l'ARNm-poly(A)+ total extrait de cortex rénal de lapin. Après 4 jours d'incubation, l'accumulation Na+-dépendante de 3H-L-proline dans les oocytes (ARNm) est 2 fois supérieure à celle mesurée dans les oocytes contrôles. L'ARNm total a été ensuite fractionné par centrifugation sur gradient de sucrose. Une fraction (1.7-2.2 kb) stimule l'expression du cotransport Na+/proline d'environ 5 fois par rapport aux contrôles. En conclusion, l'obtention d'une fraction d'ARNm enrichie en cotransporteurs Na+/proline constitue une étape essentielle de la stratégie de clonage par expression du gène impliqué.

Contexte

Section :
Biologie moléculaire
news icon Thème du colloque :
Biologie moléculaire
host icon Hôte : Université de Montréal

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Titre du colloque :

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