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Extraction d'ADN et amplification de sites STR sur des échantillons de type judiciaire

Sarah Bourgoin
Pascale Dombrowski
Sarah Bourgoin
SB

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Sarah Bourgoin

Résumé du colloque

Les échantillons biologiques soumis pour expertise en sciences judiciaires (salive, sang, sperme et phanères) contiennent parfois des quantités insuffisantes d'ADN pour la détermination de profils génétiques par la méthode des RFLP (restriction fragment length polymorphisms). Il est maintenant possible de tirer profit de la présence dans le génome humain de courtes séquences répétitives (4-7 nucléotides) appelées STR (Short Tandem Repeats) et qui sont polymorphiques quant au nombre de répétitions. L'amplification simultanée de plusieurs sites STR par la réaction de la polymérase en chaîne (PCR-multiplex) permet en effet d'obtenir un profil génétique très discriminant à partir d'une quantité minime de matériel. Malheureusement, les échantillons biologiques sont fréquemment contaminés par des substances qui inhibent la PCR. Nous avons soumis une série d'échantillons réfractaires à l'amplification (sang sur bois, salive sur rabats d'enveloppe, etc.) à trois protocoles d'extraction d'ADN: 1) extraction organique au phénol-chloroforme, 2) colonnes QIAAMP de Qiagen et 3) précipitation des protéines ('salting out'). La qualité de l'ADN extrait a été vérifiée par l'amplification, à l'aide d'amorces fluorescentes, de onze sites variables répartis en trois systèmes STR (STR-1: sites D3S1358, D21S11, FGA; STR-2: sites vWA, THO1, F13A1, fes/fps; STR-3: sites D5S818, D13S317, D7S820 et amélogénine). Nos résultats préliminaires suggèrent que le protocole Qiagen est généralement comparable ou supérieur aux deux autres méthodes tant par le rendement à l'extraction que par l'intensité et la qualité des produits d'amplification. Il est également observé que l'effet des contaminants varie selon les différents sites génétiques. Nous apportons présentement des modifications aux protocoles d'amplification pour améliorer la qualité du signal obtenu avec certains échantillons et l'ensemble de ces résultats seront présentés.

Contexte

Section :
Biologie cellulaire et moléculaire
news icon Thème du colloque :
Biologie cellulaire et moléculaire
host icon Hôte : Université de Trois-Rivières

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Titre du colloque :

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