Colloque

Extraction différentielle rapide d'ADN sur des lavages vaginaux pour PCR multiplex

Sarah Bourgoin

Vahé Sarafian

Christine Jolicoeur

France Mailly

Jean Bergeron

Pascale Dombrowski

Membre a labase

Sarah Bourgoin

Résumé du colloque

L'amplification simultanée de plusieurs loci (PCR multiplex) présentant un nombre variable de courtes séquences répétitives (STR) est utilisée en biologie judiciaire pour établir des profils génétiques discriminants. Les causes d'agressions sexuelles sont fréquentes en biologie judiciaire et les échantillons résultants comportent un mélange de cellules provenant de la victime et de l'agresseur. Ce mélange doit être séparé pour permettre la détermination de profils génétiques distincts. Nous avons élaboré une méthode d'extraction différentielle rapide (3 heures) de l'ADN pour séparer les fractions épithéliales et spermatozoïdes des lavages vaginaux et obtenir de l'ADN amplifiable par PCR multiplex. La fraction épithéliale et les spermatozoïdes sont mis en présence d'une solution non-ionique contenant des réactifs tels la protéinase K (PK), le DTT, le SDS ou le NaOH. Des essais de lyses multiples de la fraction épithéliale ont été réalisés. Tous les résultats obtenus ont été comparés à ceux de la méthode standard organique. L'ADN est dosé par chimiluminescence et amplifié en utilisant des amorces couplées à des fluorochromes. Les produits du PCR sont détectés sur des appareils ABD 377 Genescanner. La lyse optimale des deux fractions nécessite des réactifs spécifiques et différents pour chacunes d'elles. L'extraction différentielle rapide donne des rendements en ADN comparable à la méthode organique et permet d'obtenir des profils d'excellente qualité. Une étape intermédiaire de deuxième lyse de la fraction épithéliale permet d'obtenir des profils distincts des fractions épithéliales et spermatozoïdes. Cette extraction différentielle rapide de l'ADN des lavages vaginaux nécessite peu de manipulations, réduisant ainsi les risques d'erreur et la perte d'échantillon lorsque la quantité de matériel est limitée.

Contexte

Section :

Biologie et génétique moléculaires

Thème du colloque :

Biologie et génétique moléculaires

Responsables :

Louis Bernatchez

Hôte : Université Laval

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Titre du colloque :

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