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Extraction et reconstitution du transporteur rénal de phosphate

Marie-Claude Delisle
Raynald Laprade
Richard Beliveau
Vincent Vachon
Sylvie Giroux
MD

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Marie-Claude Delisle

Résumé du colloque

La purification d'un transporteur membranaire fonctionnel implique le choix de conditions physico-chimiques compatibles avec le maintien de son activité biologique lors de chacune des étapes de solubilisation, de chromatographie et de reconstitution. Le transporteur responsable de la réabsorption rénale du phosphate s'est avéré particulièrement sensible à la composition des tampons d'extraction. Celui-ci coïncide avec les lipides extraits de la membrane rénale et ne peut être réactivé en absence de l'association du peu des lipides extraits du duodénum. Le milieu d'extraction doit contenir une faible concentration de sodium pour permettre l'extraction de l'eau de la solution. Le glycérol peut cependant être remplacé par du phosphate de sodium ou de potassium (150 mM). En l'absence de cette concentration en présence de glycérol, la force ionique du milieu n'exerce que peu d'effet sur la réactivation. Le glycérol ne peut pas être remplacé par du phosphate de sodium ou de potassium. Le transport de phosphate dans les vésicules reconstituées dépend de la concentration de sodium et du pH utilisés lors de la solubilisation. Il est augmenté lorsque le tampon d'extraction contient un réducteur, le dithionite. Ces données permettent de rendre compte de la sensibilité du transporteur lors de sa purification.

Contexte

Section :
Biochimie
news icon Thème du colloque :
Biochimie
host icon Hôte : Université de Montréal

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Titre du colloque :

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Thème du colloque :

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