Communication

Fonction d’une glycine conservée chez les glutamyl-ARNt synthétases, et présente chez d’autres aminoacyl-ARNt synthétases dans un contexte structural semblable

Daniel Dubois

Jacques Lapointe

Sébastien Blais

Membre a labase

Daniel Dubois

Résumé de la communication

Les 20 aminoacyl-ARNt synthétases, qui catalysent la première étape de la biosynthèse des protéines sont regroupées en deux classes structurales distinctes comprenant chacunes 10 membres. L’alignement des séquences peptidiques de quelques glutamyl-ARNt synthétases (GluRS) et glutaminyl-ARNt synthétases (GlnRS), qui appartiennent à la classe 1, avait permis d’identifier 6 régions (a-g) particulièrement bien conservées et appelées motifs (1). Jusqu’à maintenant, aucune fonction n’a pu être attribuée au motif g (G254YLPEAL chez la GluRS de E. coli), situé à bonne distance du site actif. La substitution de la glycine254 par un aspartate rend la GluRS de E. coli thermosensible. La publication récente de nombreuses séquences peptiques de GluRS et GlnRS ainsi que de la structure tridimentionnelle de la GluRS de Thermus thermophilus (2) nous a permis d’obtenir de nouveaux alignements qui révèlent que le motif g n’est présent que chez les GluRS d’origine procaryote, mais que la glycine est conservée chez toutes les GluRS et GlnRS de séquences connues. Au delà de la sous-classe GluRS/GlnRS, une glycine fut aussi retrouvée dans un contexte structural semblable chez l’isoleucyl-ARNt synthétase de S. aureus et la methionyl-ARNt synthétase de T. thermophilus, deux enzyme de la classe 1 peu apparentées aux GluRS et GlnRS. La caractérisation biochimique du variants G254D de la GluRS de E. coli n’a pas été possible à cause de sa trop grande instabilité en solution. Nous avons construit des vecteurs permettant la surproduction et la purification rapide par chromatographie d’affinité d’autres variants de la GluRS altérés à la même position (G254A, G254S et G254R). Leur thermostabilité nous a permis de les caractériser. Les valeurs du kcat de ces variants dans la réaction d’aminoacylation de l’ARNt(Glu) sont significativement plus faibles que celle de la GluRS sauvage (30 fois pour la GluRS G254R) mais leur Km pour le glutamate est semblable à celui de la GluRS sauvage. De plus, la quantité de glutamyl-ARNt(Glu) formé en présence de ces variants augmente exponentiellement en fonction du temps et non linéairement (comme c’est le cas avec la GluRS sauvage), sauf s’ils ont été pré-incubés en présence d’ATP ou d’ARNt(Glu) et de glutamate. Ces résultats suggèrent que la glycine conservée chez toutes les GluRS connues facilite un changement conformationnel de la GluRS qui permet le positionnement des substrats pour la réaction.

Contexte

Section :

Biochimie, biologies cellulaire et moléculaire

Domaine de la communication :

Biochimie, biologies cellulaire et moléculaire

Hôte : Université de Montréal

Découvrez d'autres communications scientifiques

Dans le même domaine
Du même congressiste

Thème du communication :

Biochimie, biologies cellulaire et moléculaire

VASAP-60 : Une protéine acide de 60 kDa associée aux vésicules intracellulaires

Sophie Brûlé

Le complexe AHR/Arnt et la protéine p53 sont responsables de l'induction du gène mdr1 de souris par…

Marie-Claude Mathieu

Caractérisation de sphéroïdes multicellulaires sensibles et résistants aux médicaments dans les cel…

Sandra Turcotte

Voir tous les contenus de ce communication

Autres communications du même congressiste :

Domaine de la communication :

Biochimie, biologies cellulaire et moléculaire

Aspects évolutifs et structuraux de la reconnaissance de l'ARNtGlu, de l'ATP et du glutamate chez l…

Daniel Dubois

Des agents conscients, meilleurs tuteurs

Daniel Dubois

Étude de la reconnaissance spécifique du glutamate par la glutamyl-tRNA synthétase d'Escherichia co…

Daniel Dubois