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Identification de domaines homologues aux composantes régulant les gènes de virulence de Bordetella pertussis chez Pseudomonas aeruginosa

Laurent Sabbagh
Guy Cardinal
Roger C. Levesque
LS

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Laurent Sabbagh

Résumé du colloque

Pseudomonas aeruginosa est un pathogène opportuniste responsable de plus de 90 % du taux de mortalité chez les patients atteints de la mucoviscidose. Comme divers microorganismes, P. aeruginosa produit plusieurs facteurs de virulence qui entrainent la colonisation des voies respiratoires de l’hôte. Chez B. pertussis, le pathogène responsable de la coqueluche, il existe un système à deux composantes qui régule l’expression des gènes de virulence. Des homologues des différents domaines des protéines BvgS et BvgA ont été isolés chez P. aeruginosa par la méthode du Pooled Cloned PCR BAC (PCPB) en criblant une banque de P. aeruginosa clonée dans le vecteur pBeloBAC11. La protéine BvgS de B. pertussis contient trois domaines: le transmetteur, le receveur et le C-terminal. Les homologues du domaine transmetteur et C-terminal ont été identifiés parmi la banque de P. aeruginosa et ont une identité de 68 % et de 33 % aux domaines de BvgS, respectivement. Les domaines isolés contiennent des acides aminés conservés, tels que His729 du domaine transmetteur et His1172 du domaine C-terminal qui sont nécessaires pendant les étapes de phosphorylation, suite à un signal extracellulaire, chez B. pertussis. Le gène codant la protéine homologue au domaine C-terminal de BvgS a été cloné dans un vecteur d’expression pET par lequel la protéine a été surexprimée dans E. coli HMS174 (lDE3) et purifiée par histidine Tag. L’homologue à BvgA chez P. aeruginosa montre une identité de 66 % avec la protéine de B. pertussis et contient aussi des acides aminés conservés comme Asp9, Asp10, Asp54 et Lys104, qui sont impliqués dans les dernières étapes de phosphorylation, avant que la protéine se lie à l’ADN pour contrôler l’expression des gènes de virulence chez B. pertussis. L’étude de ces domaines isolés va nous permettre de caractériser si un contrôle transcriptionnel des gènes de virulence existe chez P. aeruginosa, semblable au système à deux composantes chez B. pertussis.

Contexte

Section :
Biologie et génétique moléculaires
news icon Thème du colloque :
Biologie et génétique moléculaires
manager icon Responsables :
Louis Bernatchez
host icon Hôte : Université Laval

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Titre du colloque :

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