Colloque

Identification de fragments Bam H I de l'ADN HCMV à l'aide de sondes marquées par photobiotinylation

Albena Pramatarova

Claude Hamelin

Membre a labase

Albena Pramatarova

Résumé du colloque

La construction d'une banque de plasmides recombinants portant l'ensemble du génome de cytomégalovirus humain (HCMV) sous la forme de fragments Bam H I a été grandement facilitée par l'utilisation de sondes ADN marquées avec la photobiotine, dans des expériences d'hybridation moléculaire. Normalement, la biotinylation nonenzymatique de l'ADN se fait en gardant la solution à quelques cm d'une puissante lampe au mercure pendant 20 min. Les problèmes liés au fort dégagement de chaleur sont évités en irradiant l'échantillon sur de la glace. Nos résultats montrent comment des molécules d'ADN peuvent être photobiotinylées en quelques secondes et sans élévation de température, en l'absence d'un flash électronique. Des expériences d'hybridation sur filtre, ayant pour but l'isolement d'un dérivé de pAT153 avec le fragment Bam H I-P de l'ADN HCMV comme insert, confirment l'utilité de cette méthode nonenzymatique de marquage des acides nucléiques à la biotine.

Contexte

Section :

Biologie moléculaire

Thème du colloque :

Biologie moléculaire

Hôte : Université de Sherbrooke

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Titre du colloque :

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