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Identification de gènes différentiellement exprimés dans les cellules de granulosa bovine et réprimés par l’hormone chorionique gonadotropine humaine (hCG)

Kalidou Ndiaye
Jacques Lussier
David W. Silversides
Jean Sirois
KN

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Kalidou Ndiaye

Résumé de la communication

Les mécanismes moléculaires impliqués dans la croissance folliculaire terminale ainsi que les processus ovulatoires et de la lutéinisation sont peu connus. L’objectif était d’identifier les gènes différentiellement exprimés dans les cellules de granulosa (GC) de follicules dominants (DOM) comparés aux follicules induits à l’hCG (OVU) en utilisant l’approche de l’hybridation soustractive suppressive (SSH). Les cycles oestraux de huit vaches ont été synchronisés par l’injection de PGF2a et la croissance folliculaire ovarienne a été suivie par échographie transrectale. Les GC ont été obtenues à partir des DOM à J5 du cycle oestral (n=4) ou 22 heures suivant l’injection d’hCG (n=4). Les GC ont été aspirées, les ARN extraits et transformés en ADNc par l’approche SMART cDNA (Clontech), puis la SSH a été réalisée par la trousse PCR-Select (Clontech). Les ADNc des OVU ont été soustraits des DOM (DOM-OVU) et inversement (OVU-DOM), puis l’efficacité de la soustraction a été vérifiée par PCR. Une génothèque soustraite d’ADNc (DOM-OVU) a été générée à partir de laquelle 940 colonies ont été aléatoirement sélectionnées. Les inserts d’ADNc ont été amplifiés par PCR afin de générer des macro-réseaux identiques permettant ainsi le criblage différentiel à l’aide de sondes marqués au P32 issues d’ADNc non soustraits ou soustraits. Le criblage de 916 clones de la génothèque d’ADNc DOM-OVU a révélé que 24,2 % (222/916) des clones ont démontré une expression différentielle, parmi lesquels 92 % (204/222) ont été séquencés, analysés dans GenBank et classés comme suit : 1) séquences d’ADNc et fonction connues (64,2 % soit 131/204); 2) séquences connues aux fonctions inconnues (24 % soit 49/204); et 3) séquences inconnues (11,7 % soit 24/204). Nous concluons que nous avons identifié des gènes (connus et inconnus) qui sont différentiellement exprimés dans les GC de follicules dominants et qui sont réprimés ou diminués par la LH/hCG au moment de l’ovulation.

Contexte

Section :
Biochimie, biologies cellulaire et moléculaire
news icon Domaine de la communication :
Biochimie, biologies cellulaire et moléculaire
host icon Hôte : Université du Québec à Montréal

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Thème du communication :

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