Communication

Identification de gènes essentiels in vivo chez Pseudomonas aeruginosa

Dario Lehoux

Roger C. Levesque

François Sanschagrin

Membre a labase

Dario Lehoux

Résumé de la communication

Pseudomonas aeruginosa (PA) est un pathogène opportuniste causant des infections secondaires chez les personnes atteintes de mucoviscidose. La mutagénèse avec étiquettes d’ADN uniques ("PCR-based signature tagged mutagenesis" (PBSTM)) permet d’identifier des gènes essentiels à l’initiation et/ou au maintient de l’infection. Dans cette méthode, l’identification de gènes essentiels in vivo se fait par sélection phénotypique négative. La PBSTM originale utilise 12 mini-Tn5s pour construire 12 banques de mutants avec étiquettes. Ces mutants peuvent être criblés par groupe de 12. En utilisant la PBSTM, nous avons criblé 1 056 mutants de PA et identifié 13 mutants atténués. Le niveau d’atténuation de ces mutants a été quantifié en mesurant le taux de croissance in vivo dans un modèle d'infection pulmonaire chronique chez le rat. Pour couvrir le génome total de PA (6.3 Mb), nous avons modifié la PBSTM en élaborant 24 oligonucleotides (étiquettes d’ADN) définis qui ont été clonés dans 3 mini-Tn5 différents. Les 72 constructions résultantes peuvent être amplifiées spécifiquement par PCR. Les mini-transposons avec étiquettes ont été transférés dans PA donnant 72 banques de 96 mutants. Ces 6 912 mutants seront sélectionnés in vivo par groupe de 96 mutants avec étiquettes d’ADN uniques dans un seul animal. Cette amélioration permet de réduire le nombre d'animaux utilisés et d’identifier des gènes essentiels à l’infection pulmonaire chronique.

Contexte

Section :

Microbiologie, virologie et immunologie

Domaine de la communication :

Microbiologie, virologie et immunologie

Hôte : Université Laval

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Thème du communication :

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