Colloque

Identification de protéine-kinases et détermination de leur spécificité

Yves Durocher

Simone Chevalier

Membre a labase

Yves Durocher

Résumé du colloque

La phosphorylation des protéines est cruciale pour la régulation des fonctions cellulaires. Pour identifier les protéine-kinases dans le cytosol de prostate humaine, nous avons d'abord procédé à l'électrophorèse des protéines en milieu dénaturant puis à leur renaturation suivie d'une incubation en présence d'ATP-[γ32P]. L'analyse autoradiographique nous a permis de détecter neuf sérine-thréonine kinases, et cela démontré par l'analyse des acides aminés phosphorylés. Pour détecter les tyrosine-kinases (TK), un polymère de glutamate et de tyrosine (poly GT), a été ajouté aux préparations avant l'électrophorèse. Suite à la renaturation et l'incubation avec l'ATP, les protéines ont été pontées (glutaraldéhyde) puis le gel chauffé en milieu alcalin. Trois TK, une majeure 36 50 kDa et de mineures de 60 et 82kDa ont ainsi été identifiées et ceci fut confirmé par la présence exclusive de phosphotyrosine. Ainsi, à partir de préparations non purifiées, il est possible d'identifier à la fois des sérine-thréonine et des TK.

Contexte

Section :

Biochimie

Thème du colloque :

Biochimie

Hôte : Université de Montréal

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Titre du colloque :

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