Colloque

Identification des sites de contact entre la Glutamyl-tRNA synthétase et l'extrémité 3' du tRNAGlu chez Escherichia coli

Éric Madore

Jacques Lapointe

ÉM

Membre a labase

Éric Madore

Résumé du colloque

La glutamyl-tRNA synthétase (GluRS) est une des trois aminoacyl-tRNA synthétases qui requiert son tRNA lors de l’activation de l’acide aminé. Dans le but d’identifier le(s) site(s) de contact entre la GluRS et l’extrémité 3’ du tRNAGlu, nous avons ponté un tRNAGlu-C-C-[32P]A au site actif de cette enzyme (le groupement ribose à l’extrémité 3’ du tRNA est oxydé au périodate, ce qui lui permet de former une base de Schiff avec les amines présentes sur l’enzyme). Par SDS-PAGE, nous avons identifié deux complexes distincts. Ces derniers ont été purifiés, et digérés à la RNAse T1 et à la trypsine. Les peptides ainsi obtenus ont été séparés par chromatographie sur couche mince à deux dimensions. Ceux liés à l’AMP[32P] de l’extrémité 3’ du tRNAGlu sont identifiés par autoradiographie et séquencés par dégradation d’Edman. Pour un des complexes, nous avons identifié 3 sites majeurs de pontage et un site mineur. Les trois sites majeurs se trouvent dans la cavité qui lie l’extrémité 3’ du tRNA. Un de ces sites correspond à la position de l’extrémité 3’ du tRNA lors de la réaction d’aminoacylation (lorsqu’on compare avec la structure du complexe tRNAGln:GlnRS). Les deux autres sites correspondraient à différentes étapes lors du dépliement de l’extrémité 3’ du tRNAGlu.