Colloque

Identification du signal de localisation nucléaire de la petite protéine G nucléaire GSP1 chez S. cerevisiae

Mehrdad Hejazi

Ursula Stochaj

Pierre Belhumeur

Fléchère Fortin

Werner Barth

Membre a labase

Mehrdad Hejazi

Résumé du colloque

La protéine Ran/TC4 humaine est une petite protéine G de type Ras, impliquée dans de nombreux processus liés au cycle cellulaire et aux fonctions de base du noyau. C'est une protéine abondante qui est localisée au noyau. Son homologue chez Saccharomyces cerevisiae se nomme GSP1. Nous avons identifié une séquence qui pouvait constituer un signal de localisation nucléaire (NLS) bipartite, semblable à celui trouvé chez la nucléoplasmine de Xenopus. Nous avons donc cherché à démontrer qu'il s'agissait bien d'un tel signal. Après avoir muté les trois acides aminés basiques (RKK) du côté C-terminal du signal en trois acides aminés neutres (GMI), nous avons entrepris des expériences d'immunofluorescence et de gradients pour localiser GSP1 dans la levure. L'activité de la protéine mutante a ensuite été testée, par complémentation d'un mutant nul de GSP1. Nous avons également fusionné cette séquence à la B-galactosidase afin de vérifier son effet sur une protéine hétérologue. L'interaction de GSP1 avec une protéine de la nucléoporine (NSP1) a été démontrée in vitro. Finalement, nous avons réussi démontrer la compartimentation des régulateurs de GSP1, en empêchant différents mutants dominants-létaux de se rendre au noyau. Ces expériences montrent hors de tout doute que cette séquence constitue bien un NLS. En effet, gsp1 GMI est inactive, ne va plus au noyau et n'interagit pas avec NSP1, tandis que la protéine sauvage le fait. De plus, cette séquence permet de localiser la B-galactosidase au noyau. Les expériences futures pourront viser à disséquer fonctionnellement ce signal comme un NLS bipartite.

Contexte

Section :

Biologie cellulaire et moléculaire

Thème du colloque :

Biologie cellulaire et moléculaire

Hôte : Université McGill

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Titre du colloque :

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