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Immobilisation sélective de la céruloplasmine sur le même matériel chromatographe utilisé pour sa purification

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Sylvie Neidhart

Résumé du colloque

La céruloplasmine, une oxydase plasmatique (EC.1.3.3.1), est une protéine multifonctionnelle (α2-globuline) qui régule le transport du cuivre, contrôle la concentration des amines biogènes et est un antioxydant sérique important, avec un important rôle au niveau de la modulation de la réponse inflammatoire. Quand on fait passer du plasma bovin à travers un matériel chromatographique possédant des groupes fonctionnels aminothiyles, la céruloplasmine est retenue de manière sélective. Cette méthode de purification en une seule étape est facile et donne un rendement de 60%. L'immobilisation directe de la céruloplasmine, dans ce milieu est encore absorbée et concentrée dans la partie inférieure du gel (AE-agrose-C) est obtenue par un traitement à la carbodiimide avec un rendement de couplage de 50 à 70%. Les résultats montrent que la céruloplasmine ainsi fixée garde encore son activité enzymatique. Les études faites ont montré une diminution légère de l'affinité mais subsistent en une réaction maximale de 81% par rapport à la protéine libre. La céruloplasmine immobilisée est beaucoup plus résistante à la protéolyse qu'elle ne l'est sous forme libre. En présence de la pronase et de la thermolysine, l'activité de la céruloplasmine libre a été perdue en 2 à 3 heures. Cependant, dans des conditions semblables, la céruloplasmine immobilisée a montré une très haute stabilité, perdant son activité après 24 heures d'attaque protéolytique.

Contexte

Section :
Biotechnologie
news icon Thème du colloque :
Biotechnologie
host icon Hôte : Université du Québec à Montréal

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Titre du colloque :

Biotechnologie

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