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Interaction de la RNA polymérase d'Escherichia coli avec le DNA du phage T7 traité par le méthanesulfonate d'éthyle

M. Guertin
Mamet-Bratley Mamet-Bratley
M. Zollinger
MG

Membre a labase

M. Guertin

Résumé du colloque

Nous avons montré que l'activité matrice du DNA de T7, mesurée par synthèse de RNA in vitro, est diminuée après traitement par le méthanesulfonate d'éthyle (EMS). La quantité de RNA produite est diminuée, mais la longueur des chaînes de RNA ne change pas. Pour mieux comprendre le mécanisme de cette inhibition, nous avons étudié la première étape de la transcription, l'interaction entre la RNA polymérase d'E. coli et le DNA de T7. Nous avons d'abord mesuré l'affinité de l'enzyme pour le DNA étudié par l'épreuve de compétition. Après traitement du DNA par l'EMS, l'affinité diminue de façon significative. Nous avons ensuite mesuré le nombre de liaisons DNA-enzyme par microscopie électronique. Dans le cas du DNA de T7 non-traité, nous avons mesuré la fixation de l'enzyme aux trois sites promoteurs connus. Pour le DNA traité par l'EMS, le nombre de molécules fixées est fortement diminué; tous les sites spécifiques sont également diminués. L'inhibition, par l'EMS, de la transcription in vitro est donc due à une diminution du nombre de molécules d'enzyme fixées aux sites promoteurs sur le DNA, d'où commence la synthèse de RNA.

Contexte

Section :
Biochimie
news icon Thème du colloque :
Biochimie
host icon Hôte : Université de Sherbrooke

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Titre du colloque :

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