Colloque

Interaction de l'hémoglobine normale et modifiée avec les films d'agarose

Karima Abdesslem

M. Alexandre Mateescu

Membre a labase

Karima Abdesslem

Résumé du colloque

L'hémoglobine est une chromoprotéine ayant un rôle important dans le transport d'oxygène. Des travaux précédents ont relevé des interactions spécifiques et sélectives de l'hémoglobine avec des matériaux chromatographiques à base de polysaccharides. L'objectif du projet est de mieux élucider le mécanisme d'interaction des diverses formes normales et pathologiques de l'hémoglobine, avec des polysaccharides à base d'agarose, permettant ainsi d'envisager des méthodes de laboratoire pour le diagnostic des hémoglobinopathies. On a préparé des films d'agarose à partir de suspensions de diverses concentrations : 0,5%; 1% et 2%. La surface des films était de 28,26 mm2 avec des épaisseurs de 40 à 60 um. Les quantités d'hémoglobine mises en présence des films étaient de 0 à 5 mg. Une glycosylation non enzymatique de l'hémoglobine a été réalisée in vitro. Les résultats obtenus ont relevé l'existence des interactions spécifiques entre l'hémoglobine et les films d'agarose en fonction des concentrations des films, ainsi que des concentrations et du type d'hémoglobine. On a étudié les interactions par des représentations Scatchard pour établir les constantes de liaisons (Kd) et les quantités maximales retenues (Bmax). Avec des films d'agarose 2%, la quantité maximale d'hémoglobine liée était de 543 ug/mg film, de 472 pour le film 1% et de 395 pour le film 0,5%. Les constantes de liaison étaient de 0,676; 0,255 et 0,089 pour les films de 2%; 1% et 0,5%, respectivement, montrant une augmentation de l'affinité avec la diminution de la concentration des films. On a aussi étudié l'effet de la température sur cette interaction avec les films d'agarose à 37 C ; 22 C et 4 C. Les résultats montrent une diminution de l'interaction avec la diminution de la température. Les résultats obtenus avec les échantillons d'hémoglobine glycosylée relèvent une différence majeure d'interaction entre l'hémoglobine normale et modifiée, cette dernière en présentant une faible interaction avec les films.