Colloque

Interactions atomiques des inactivateurs suicides avec les β-lactamases de la classe A : le modèle PSE-4

Yves Sabbagh

Roger C. Levesque

François Sanschagrin

Membre a labase

Yves Sabbagh

Résumé du colloque

L’hydrolyse des antibiotiques par les b-lactamases est le mécanisme le plus commun de résistance aux antibiotiques. Pour combattre cette résistance, il existe des inactivateurs suicides comme le sulbactam, le tazobactam et l’acide clavulanique, qui vont inactiver la b-lactamase. Ces inactivateurs sont efficaces contre les b-lactamases de la classe A. Des mutations ont été effectuées aux positions 75-77 et 216-218 de la b-lactamase PSE-4 en utilisant la mutagenèse par remplacement aléatoire de trois codons. Ceci avait pour but d’étudier les interactions de ces acides aminés avec les inactivateurs suicides. Les mutants ont été sélectionnés sur gélose contenant de l’ampicilline avec sulbactam (SLB) (78 microg/ml, 8 microg/ml) et la carbenicilline avec SLB (1 250 microg/ml, 8 microg/ml) pour choisir des mutants qui démontraient une augmentation ou diminution de sensibilité aux inactivateurs suicides. Pour les positions 75-77, un mutant obtenu avec les changements IAC à VLC a démontré augmentation de sensibilité envers l’acide clavulanique avec la carbenicilline où un changement de 313 microg/ml à 78 microg/ml est observé pour la concentration minimale inhibitrice (CMI). Les études cinétiques ont démontré une baisse de la constante d’affinité des inactivateurs (KI) de 14 fois pour l’acide clavulanique, soit une augmentation de l’affinité de l’inactivateur envers l’enzyme. Pour les positions 216-218, un mutant obtenu avec les changements VTG à SAR a démontré une diminution de sensibilité envers le sulbactam avec l’ampicilline où un changement de 156 microg/ml à 625 microg/ml est observé pour la CMI. Les études cinétiques démontrent une augmentation du KI de 30 et 37 fois pour le tazobactam et le sulbactam respectivement. Les b-lactamases des deux mutants ont été purifiées et des études structurales ont été poursuivies. Ces travaux vont montrer l’importance des interactions atomiques avec les inactivateurs suicides. Ceux-ci vont aider à définir les paramètres impliqués dans l’hydrolyse des antibiotiques et le mécanisme d’inactivation par les inactivateurs suicides.

Contexte

Section :

Biochimie et biologie structurale

Thème du colloque :

Biochimie et biologie structurale

Responsables :

Michel Guertin

Hôte : Université Laval

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Titre du colloque :

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