Colloque

Isolation et caractérisation d'un variant de l'ARNm de l'histone H4 chez le rat au niveau des macrophages alvéolaires

Andréanne Bonhomme

Simon Lemaire

Michel Dumont

Membre a labase

Andréanne Bonhomme

Résumé du colloque

Les histones sont des protéines retrouvées au niveau des chromatines et sont impliquées dans le mécanisme de la réplication de l'ADN dans le noyau. Une des caractéristiques importante et unique à l'histone H4 au niveau de l'ARNm est l'absence de la queue de Poly A. Récemment, l'isolation d'une séquence d'un variant polyadénylé de l'histone H4 nommé H4-v.1 a été réalisé chez le bœuf au niveau de la surrénale. Ces observations nous indiquent que certaines formes d'histones H4 (variantes) pourraient donc avoir un rôle et une action extranucléaire. Présentement, nous tentons d'isoler la séquence de ce variant auprès du rat dans le but de vérifier l'expression de ce gène dans différents tissus et d'analyser chez les macrophages en culture primaire la synthèse des peptides libérés lors de leur stimulation avec le lipopolysaccharide (LPS). Cette approche pourrait nous permettre d'illustrer l'induction particulière du gène codant pour H4-v.1 dans des modèles d'animaux de maladies inflammatoires et/ou autoimmunes. Pour isoler ce variant chez le rat, nous avons stimulé des macrophages alvéolaires avec le LPS afin d'effectuer une extraction et purification de l'ARNt. Ensuite, une RT-PCR (oligo dt) avec MuLV RT fut effectuée sur l'ARNm poly A+. La méthode de détection est la PCR et la sélection des amorces utilisées pour générer notre ADN, fut ceux fabriqués lors de l'isolation du gène chez le bœuf. Nous avons obtenu un produit intéressant au niveau de la séquence codante avec les amorces H4-5 et HG6P3. Le clonage et le séquençage nous démontrent une homologie à l'histone H4 chez le rat. Ayant la partie codante 5' du gène (240 pb), il nous reste maintenant à isoler la partie non-codante 3' du gène et faire une amplification de régions en aval (3') afin de connaître la séquence au complet.

Contexte

Section :

Pharmacologie

Thème du colloque :

Pharmacologie

Hôte : Université d’Ottawa

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