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Isolation par centrifugation isopycnique de l'ARN provenant des oeufs d'oursins de mer

E.D. Laigle
G.H. Cousineau
EL

Membre a labase

E.D. Laigle

Résumé du colloque

Une modification de la méthode de centrifugation isopycnique d'homogénats totaux des oeufs d'oursins de mer est présentée. La préparation de la solution d'iodure de potassium a permis d'obtenir un accroissement considérable de la fluorescence des complexes acides nucléiques. Une étude ultérieure, par cinémicrographie, localisation et élution, a été facilitée des bandes. Le matériel initial fut préparé dans un tampon tris (0,02M, pH 7,4, 0°C) pour être ensuite traité de la façon suivante: protéinase K (200 µg/ml); Sarkosyl (0,2%); EDTA (1,25 µM/µg) CaCl2 (0,05M) et citrate de sodium (5 mM); bisulfite de sodium (1,0M); KI (D1=1,57 ± 0,03), et, enfin, centrifugé à 62,671 x g (65 hrs, 20°C) dans une l'empilage KI max, sous vide, avec des tubes de grande capacité, réduisant ainsi la longueur des gradients et le temps d'ultracentrifugation. Par ce fait il est possible d'employer des échantillons de départ très concentrés (mg) de sorte que le rendement final de cette méthode d'extraction de l'ARN s'avère aussi bien que qualitatif. Sept extractions ont été furent faites et les analyses, profils obtenus après électrophorèse sur gel de polyacrylamide, ont donné les résultats suivants: 26S, 23S, 18S, 12S, 9S, 5S et 4S.

Contexte

Section :
Biologie cellulaire et moléculaire
news icon Thème du colloque :
Biologie cellulaire et moléculaire
host icon Hôte : Université de Montréal

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Titre du colloque :

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