Colloque

Isolement et caractérisation d'UGT2B20 : une nouvelle UDP-glucuronosyltransférase intervenant dans le métabolisme des androgènes chez le singe cynomolgus

Olivier Barbier

Alain Belanger

Dean W. Hum

Membre a labase

Olivier Barbier

Résumé du colloque

Les UDP-glucuronosyltransferases (UGTs) sont des enzymes membranaires du réticulum endoplasmique qui catalysent la conjugaison de l'acide glucuronique avec des composés hydrophobes tels les phénols planaires, les acides biliaires, la bilirubine et les stéroïdes. Ces composés deviennent alors plus polaires et donc plus facilement excrétables dans la bile ou l'urine. Bien que l'expression des UGTs ait été démontrée chez de nombreuses espèces, les forts taux circulants d'androgène glucuronide mesurés chez l'Homme et le singe cynomolgus indiquent que ce dernier représente le meilleur modèle animal pour l'étude et la caractérisation des UGTs. Une banque d'ADN complémentaire (ADNc) de foie de singe a été criblée et un ADNc de 2kb, UGT2B20, a été isolé. Le clone d'UGT2B20 a été transfecté de façon stable dans la lignée cellulaire HK-293. Après extraction de la fraction microsomale, des tests d'activité réalisés sur plus de 60 substrats ont permis de démontrer une activité sur les xénobiotiques comme l'eugénol, le 1-Naphtol ou la 4-méthylumbelliférone. Au niveau des substrats stéroïdiens, UGT2B20 n'a montré aucune activité sur les stéroïdes C18 et C21 alors qu'il est responsable de la glucuronidation en position 17b hydroxy de la testostérone et de la dihydrotestostérone (DHT) ainsi que de la position 3a hydroxy du 3a-Diol et de l'étiocholanolone. La détermination des propriétés cinétiques de cette enzyme montre un Km de 1,1 mM pour le 3a-Diol et de 4,8 mM pour la testostérone. L'analyse de la tissu-distribution de l'ARN messager d'UGT2B20 a montré son expression dans différents tissus périphériques tels que la prostate, le vagin, l'ovaire, la surrénale ou l'épididyme. Certaines évidences tendent à suggérer que UGT2B20 est l'orthologue chez le singe d'UGT2B15 une enzyme humaine, avec laquelle elle présente 92 % d'homologie de séquence, une spécificité de substrat similaire ainsi qu'une affinité très proche pour le 3a-Diol. Cependant, UGT2B20 présente des taux de conjugaison 5 à 10 fois plus faibles que ceux obtenus en présence d'UGT2B15. Nous avons pu montrer que ces résultats sont dus à une différence de stabilité entre ces deux protéines. En effet, en présence de cycloheximide, un inhibiteur de la traduction, UGT2B15 ne subit aucune perte d'activité après 24 heures, tandis qu'UGT2B20 ne conserve que 25 % de son activité après 15 minutes de traitement. UGT2B17, une autre enzyme humaine active sur les androgènes et très homologue à UGT2B15, présente elle aussi une demi-vie très inférieure à celle de UGT2B15. Comme, il a été montré qu'UGT2B17 est très fortement régulé par différents facteurs (facteurs de croissance, DHT,...) tandis qu'UGT2B15 ne l'est pas, nous pensons qu'il pourrait y avoir une corrélation entre la stabilité de ces enzymes et leur régulation. L'ensemble de ces résultats indiquent qu'UGT2B20 est une enzyme importante pour l'étude des relations structure-stabilité des UGTs ainsi que pour l'étude des mécanismes régissant leur régulation chez le singe, comme chez l'humain.

Contexte

Section :

Endocrinologie

Thème du colloque :

Endocrinologie

Hôte : Université Laval

Découvrez d'autres communications scientifiques

Dans le même colloque
Du même congressiste

Titre du colloque :

Endocrinologie

Effets de l'estradiol et de la progestérone sur les récepteurs NMDA et AMPA au cerveau de rat

Michel Cyr

Effets d'un repas de protéine sur les acides aminés plasmatiques, l'insuline et le glucose chez des…

Julie Soucy

Effet de l'estradiol et du tamoxifène sur la fluidité membranaire au cerveau de rat

Samir Ben Ameur

Voir tous les contenus de ce colloque

Autres communications du même congressiste :

Thème du colloque :

Endocrinologie

Isolement et caractérisation d'UGT2B20 : une nouvelle UDP-glucuronosyltransférase intervenant dans …

Olivier Barbier

Clonage et caractérisation d'une nouvelle UDP-glucuronosyltransférase (UGT2B18) de singe active sur…

David Turgeon

Isolement et caractérisation d'UGT2B20 : une nouvelle UDP-glucuronosyltransférase intervenant dans …

Olivier Barbier