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Isolement et clonage d'ADN complémentaires d'IFAPa-400

Jean-Luc Simard
Michel Vincent
Marie Duval
JS

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Jean-Luc Simard

Résumé du colloque

Parmi les protéines associées aux filaments intermédiaires du cytosquelette des cellules embryonnaires (F9), il en existe une dont l'expression a été mise en évidence à l'aide d'un anticorps monoclonal produit dans notre laboratoire (Vincent M. et Lahaie C. (1988) Biochem. Cell Biol. 66: 184-192). Elle se retrouve principalement au niveau du myocarde et des autres tissus musculaires et nerveux. Cette protéine de très haut poids moléculaire (>400kD) laisse présager une séquence codante d'au moins 10000 pb. Une approche initiale fut de cribler une banque combinée d'ADNc et d'ADNg de embryon de poulet de 10 jrs (période à laquelle l'expression d'IFAPa-400 est maximale chez l'embryon) avec l'anticorps monoclonal F511H2. Parallèlement la purification d'IFAPa-400 nous a permis d'obtenir une préparation fortement enrichie de cette protéine, conduisant à la production d'un anticorps polyclonal chez le lapin. La banque d'expression criblée avec ce polyclonal purifié par affinité a amené à l'isolement de différents clones de cDNA. Nous utilisons présentement ces sondes d'une part pour confirmer ce contrôle transcriptionnel de l'expression du gène d'IFAPa-400 durant le développement, et d'autre part pour obtenir la pleine séquence de la région codante dans le but d'élucider la structure primaire de cette protéine.

Contexte

Section :
Biologie cellulaire
news icon Thème du colloque :
Biologie cellulaire
host icon Hôte : Université Laval

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Titre du colloque :

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