Colloque

La 17β-Hydroxystéroïde déshydrogénase 1 humaine : un monomère actif a pu être obtenu par protéolyse partielle en C-terminale

Jiu-Zhen Jin

Sheng-Xiang Lin

Membre a labase

Jiu-Zhen Jin

Résumé du colloque

La 17b-Hydroxystéroïd déshydrogénase1 (17b-HSD1) intervient dans la formation des hormones stéroïd actives qui stimulent les cancers hormono-dépendants. La 17b-HSD1 a subi une protéolyse par la subtilisine. La réaction à été faite à un pH de 7.5, 37°C. La masse de chacun des polypeptides obtenus a été déterminée par l'électrophorèse de gel de polyacrylamide en présence de SDS. Un polypeptide de 32 kDa a été obtenu par chromatographie l'intéraction hydrophobique. L'analyse de la séquence du côté N-terminale nous a indiqué que les cinq premiers acide aminés en N-terminale de la 17b-HSD ayant subi la protéolyse sont identiques que celui la de la 17b-HSD1 native, ce qui confirme que la protéolyse a eu lieu du côté C-terminale. Par spectrométrie de masse, on obtient une valeur de 31.6 kDa pour l'enzyme traitée avec la subtilisine. La masse moléculaire apparente de la 17b-HSD1 native et modifiée a été déterminée lar chromatographie d'exclusion sur gel, ultracentrifugation et électrophorèse sur gel de polyacrylamide. Nous avons obtenus une masse de 68 kDa pour la 17b-HSD1 native et 32 kDa pour la forme modifiée. L'activité spécifique de l'enzyme ayant subi la protéolyse est près de la valeur de l'enzyme native (on obtient 5.5 mmol/min/mg pour la form native et 5.0 mmol/min/mg pour la form modifiée). Cependant, la 17b-HSD1 modifiée est moins stable que la forme native. C'est la première fois que une form monomerique active de cet enzyme a été obtenue. Ces résultats vont permettre de mieux comprendre la structure-fonction de domaine C-terminale de la 17b-HSD1.

Contexte

Section :

Biochimie et biologie structurale

Thème du colloque :

Biochimie et biologie structurale

Responsables :

Michel Guertin

Hôte : Université Laval

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Titre du colloque :

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