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La 5alpha-réductase humaine de type II : surproduction dans des cellules d'insectes avec un système de Baculovirus recombinant

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Sheng-Xiang Lin

Résumé du colloque

La 5 alpha-réductase humaine est une enzyme jouant un rôle clé dans la transformation de la testostérone en dihydrotestostérone. Cette dernière est un puissant androgène, responsable de la différentiation des organes génitaux externes mâles et de la prostate. Elle est aussi impliquée dans le développement de maladies humaines androgéno-dépendantes, telles que le cancer de la prostate et l’hyperplasie prostatique bénigne. Afin de concevoir des inhibiteurs efficaces et spécifiques pouvant se révéler utiles dans le traitement du cancer de la prostate, nous avons entrepris des études de crystallisation dont le but est d’établir la structure de la 5 alpha-réductase humaine. Ces études requièrent de grandes quantités de l’enzyme active purifiée. Dans ce projet de recherche, nous avons donc introduit dans un Baculovirus recombiné un vecteur ADNc de la 5 alpha-réductase II en utilisant des techniques "recombinant PCR". Ce vecteur contient 6 résidus histidine consécutifs, suivis par un site de clivage par le Facteur Xa au N-terminal de la protéine. La construction de baculovirus recombinant a été confirmée par séquençage d’ADN. La production d’enzyme recombinante, par l’infection avec baculovirus de cellules sf9 en culture, est en cours. L’enzyme recombinante produite dans des cellules d’insecte sf9 sera purifiée en utilisant une colonne chelatrice de nickel, puis récupérée par lyse en utilisant le Facteur Xa à partir de la colonne.

Contexte

Section :
Endocrinologie
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Endocrinologie
host icon Hôte : Université Laval

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Titre du colloque :

Endocrinologie

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