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La bêta-lactamase en tant que sonde spécifique pour l'étude des interactions protéine-protéine

André Galarneau
Martin Primeau
Stephen W. Michnick
Louis-Eric Trudeau
AG

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André Galarneau

Résumé de la communication

À la suite d'un stimulus spécifique, plusieurs processus cellulaires sont médiés par des interactions protéine-protéine. Ces interactions permettent de transmettre un signal provenant de la membrane jusqu'au noyau où des gènes spécifiques sont alors activés. Une technique mise au point récemment par notre laboratoire permet d'étudier ces interactions et s'appelle PCA pour " Protein Fragment Complementation Assay ". Elle consiste à scinder une protéine possédant une activité spécifique en deux fragments inactifs et de les fusionner à deux autres protéines dont on veut étudier l'interaction. Lorsque ces deux protéines interagissent, l'enzyme, convenablement reconstituée, retrouve son activité originale. Nous avons mis au point un nouveau PCA faisant intervenir la ß-lactamase ainsi que deux substrats, l'un colorimétrique, l'autre fluorométrique, afin d'étudier des interactions protéine-protéine in vitro et in vivo respectivement. La ß-Lactamase, encodée par le gène TEM1, est une protéine de 29 KD provenant de E.coli qui confère la résistance à l'ampicilline portée par plusieurs plasmides. Selon la structure tri-dimensionnelle de la protéine, nous avons séparé le gène de la TEM1 ß-Lactamase en deux fragments bien distincts. Nous avons ensuite contruit deux systèmes d'étude de ce nouveau PCA en fusionnant ces deux fragments tout d'abord à des protéines de types " zippers " de leucine GCN4 homodimèriques et ensuite au système de complémentation protéique FKBP/TOR. Aprés avoir exprimé ces fusions dans des cellules COS1, nous avons observé directement in vivo l'apparition de fluorescence à l'aide du substrat CCF2AM ou encore lysé les cellules et testé in vitro les extraits cellulaires par un essai colorimétrique avec le substrat Nitrocefin.

Contexte

Section :
Biochimie, biologies cellulaire et moléculaire
news icon Domaine de la communication :
Biochimie, biologies cellulaire et moléculaire
host icon Hôte : Université de Montréal

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