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La cartographie peptidique par électrophorèse capillaire utilisant la chymotrypsine immobilisée : étude des conditions de dénaturation et de digestion pour quelques standards

Golfam Ghafourifar
S-M. Gan
Q. V. Nguyen
K. C. Waldron
GG

Membre a labase

Golfam Ghafourifar

Résumé de la communication

L’utilisation des enzymes protéolytiques immobilisées a connu un essor considérable au cours de la dernière décennie dû principalement à leurs facilités d’utilisation dans les systèmes fluidiques et, par conséquent, pour les méthodes automatisées en protéomique. Les enzymes immobilisées ont aussi l’avantage que les pics d’autolyse sont supprimés même pour les ratios élevés en enzyme : substrat. Notre groupe a étudié plusieurs formats pour la trypsine immobilisée dans le but de faire des microréacteurs enzymatiques. Récemment, nous étudions la chymotrypsine immobilisée qui est formée par la réticulation directe avec la glutaraldéhyde. L’efficacité de la digestion de protéines peut être suivie par l’électrophorèse capillaire (CE) avec détection par absorbance ou par fluorescence lorsque les substrats protéiques portent un marqueur sur leurs résides de lysine. Il y a des différences en efficacité de digestion pour différents substrat de protéines, comme attendu, donc nous avons entrepris l’étude de l’effet des conditions de dénaturation et de digestion du substrat sur les cartes peptidiques pour les grandes protéines telle que le sérum albumine de bovin (66 kDa) ou l’hémoglobine humaine (64 kDa) comparé aux protéines plus petites telle l’anhydrase carbonique (29 kDa). Les paramètres expérimentaux comme la concentration d’urée et du calcium pendant la dénaturation, et la composition de tampon et le ratio enzyme : substrat pendant la digestion, sont examinés. Les protéines marquée

Résumé du colloque

Plusieurs conférenciers de marque participeront à ce colloque, et nous coordonnons avec le réseau national Canadien de protéomique l’attribution d’un prix annuel qui pourrait être décerné lors de cet événement.

Contexte

Section :
Protéomique et biologie des systèmes
news icon Thème du colloque :
Protéomique et biologie des systèmes
host icon Hôte : Université de Montréal

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Titre du colloque :

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