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La conception de nouveaux antimicrobiens ciblant la biosynthèse du peptidoglycane chez Pseudomonas aeruginosa

Ahmed El Zoeiby
Roger C. Levesque
François Sanschagrin
AE

Membre a labase

Ahmed El Zoeiby

Résumé de la communication

Les gènes Mur responsables des étapes cytoplasmiques de la biosynthèse du peptidoglycan sont tous des gènes essentiels et des cibles thérapeutiques potentielles. Cependant, il n’existe aucun antibiotique utilisé en clinique qui interfère avec les enzymes Mur. Les gènes murA-F ont été sousclonés dans le vecteur pET. MurA-F ont été surexprimées dans E. coli. Les protéines ont été purifiées via leur étiquette 6X His en C-terminale par une seule étape de chromatographie sur une colonne d’affinité chargée au Ni2+. Deux banques de phages M13 ont été criblées contre MurC. Ces banques expriment 3-4 x 10^9 séquences peptidiques aléatoires fusionnées à la protéine pIII du phage M13. MurA-F ont été purifiées à plus que 90 % d’homogénéité. Ces enzymes nous ont permis de reconstruire in vitro la voie de biosynthèse de l’UDP-N-acetylmuramate pentapeptide, le précurseur du peptidoglycan. Trois rondes de biocriblage ont été accomplies sur MurC. La spécificité de l’élution a été augmentée successivement de la première à la troisième ronde. L’ADN de 10 phages choisis au hasard après la deuxième et la troisième ronde a été extrait et séquencé et les séquences consensus ont été élucidées. Ces séquences peptidiques représentent des domaines d’attachement à la protéine. Deux peptides ont été synthétisés selon les séquences obtenues. Ces peptides ont été testés sur MurC par un essai enzymatique couplé et ils ont démontré une activité inhibitrice sur l’enzyme.

Contexte

Section :
Microbiologie, virologie et immunologie
news icon Domaine de la communication :
Microbiologie, virologie et immunologie
host icon Hôte : Université Laval

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