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La construction de gènes et de protéines hybrides β-Lactamase-lacZ par génie génétique

Stéphane Laflamme
Roger C. Levesque
Florence Do
Suzanne Francoeur
SL

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Stéphane Laflamme

Résumé du colloque

Le gène β-galactosidase lacZ peut être fusionné aux séquences nucléotidiques contrôlant la transcription et la traduction de gènes procaryotiques ou eucaryotiques. Nous avons adapté cette technique à l'étude des promoteurs des gènes de résistance aux antibiotiques. La cartouche lacZ de pMC1871 a été insérée dans les 2 orientations possibles dans les gènes β-lactamases OXA-1 et PSE-4 clonés dans le vecteur plasmidique pACYC184. Comme alternative, ces derniers fragments d'ADN ont été insérés dans le vecteur de fusion pMLB1034. Suite à la transformation des souches MC4100 et MEM7060, les plasmides recombinants des clones lacZ+ ont été analysés avec des enzymes de restriction afin de déterminer la taille des délétions. Le point de jonction entre les gènes β-lactamases et lacZ a été étudié par la cartographie physique détaillée. La taille des protéines hybrides détectée par électrophorèse en SDS-polyacrylamide. Les résultats obtenus ont permis de localiser les promoteurs et de déterminer l'activité transcriptionnelle. Ceci facilite la sélection de fragments d'ADN comme sondes hybrides avec des gènes β-lactamases étudiés.

Contexte

Section :
Biologie moléculaire
news icon Thème du colloque :
Biologie moléculaire
host icon Hôte : Université de Montréal

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Titre du colloque :

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