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La construction de sondes d'ADN spécifiques aux gènes β-lactamases OXA-2, AER-1 et PSE-4

Maurice Boissinot
Ann Huot
Roger C. Levesque
Josée Mercier
MB

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Maurice Boissinot

Résumé du colloque

Le clonage de gènes impliqués dans la résistance aux β-lactamases a permis de construire 3 sondes d'ADN permettant d'identifier spécifiquement les souches contenant la β-lactamase correspondante. Des fragments d'ADN obtenus par digestion avec des enzymes et restreints à partir des plasmides R46, et pUB4473: Tn1405 et du transconjugant E.coli Q7711 ont été insérés dans le vecteur plasmidique pACY184. Le clonage directionnel et la délétion de fragments d'ADN ont permis de localiser les gènes β-lactamases OXA-2, ARR-1 et PSE-4. Par hybridation moléculaire, nous avons obtenu 1 fragment d'ADN EcoRI-PstI (340pb) spécifique pour OXA-2, 2 fragments AVAI (107 et 340pb) pour AER-1 et 1 fragment HindIII-EcoRI (1070pb) reconnaissant PSE-4. La spécificité de ces sondes a été vérifiée par hybridation croisée contre les 20 β-lactamases plasmidiques connues que nous avons isolées dans des plasmides recombinants. L'existence de 7 sondes spécifiques pour les gènes TEM-1, TEM-2, PSE-1 et ROB-1 ouvre maintenant la voie à l'épidémiologie moléculaire des gènes de résistance aux antibiotiques puisque nous avons adapté la technique d'hybridation aux méthodes de la biotechnologie, facilitant ainsi les applications.

Contexte

Section :
Biologie moléculaire
news icon Thème du colloque :
Biologie moléculaire
host icon Hôte : Université de Montréal

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Titre du colloque :

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Thème du colloque :

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