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La purification de la 3β-hydroxystéroïde déshydrogénase/isomérase

Ming Zhou
Sheng-Xiang Lin
Ying Mao
Rock Breton
Isabelle Pineau
MZ

Membre a labase

Ming Zhou

Résumé du colloque

La 3β-hydroxystéroïde déshydrogénase/isomérase (3β-HSD) est une protéine membranaire présente dans les microsomes ou les mitochondries. Elle possède les deux activités suivantes: la déshydrogénation et l'isomérisation. Cette enzyme est aussi responsable de la formation de la progestérone et de l'androsténédione dans les tissus périphériques. Pour étudier la relation entre la structure et la fonction de la 3β-HSD, nous avons réussi à purifier cette enzyme tout en conservant une haute activité. La 3β-HSD a été exprimée dans les cellules Sf9 en utilisant un système de baculovirus recombinant. Les cellules Sf9 ont été lysées en présence d'un détergent anionique 0.6% désoxycholate. Le surnageant a ensuite été appliqué sur la colonne "Q-sepharose fast flow" et la 3β-HSD a été éluée avec un détergent non-ionique (0.2% tergitol NP 913). Par la suite, la 3β-HSD a été appliquée sur une deuxième colonne "hydroxyapatite", et éluée à l'aide d'un gradient de phosphate. Après la deuxième chromatographie, le détergent avec la 3β-HSD a été changé par 0.2% de dodécylsulfate. Après deux chromatographies sur colonne, l'activité spécifique de la 3β-HSD est de 270 unités/mg ce qui est plus élevé que les résultats déjà rapportés. La récupération est environ 65%.

Contexte

Section :
Biochimie, biologie moléculaire
news icon Thème du colloque :
Biochimie, biologie moléculaire
host icon Hôte : Université du Québec à Montréal

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Titre du colloque :

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Thème du colloque :

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