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La sédimentation isopycnique sur gradient de Percoll: une nouvelle technique d'isolement des miniclules

Mario Estable
Guy Bellemare
François Paradis
ME

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Mario Estable

Résumé du colloque

La souche P678-54 d'E. coli en phase de croissance exponentielle génère de façon continue des particules sphériques de 0,8 µm. Ces miniclules ne contiennent pas de DNA chromosomique par contre, chez les recombinants de cette souche, on retrouve du DNA plasmidique. Les miniclules servent en génie génétique à déterminer par transcription-traduction couplée la présence de gène(s) actifs dans des clones. Pour obtenir des miniclules libres de cellules-mères, nous avons mis au point une sédimentation sur un gradient de silice (PERCOLL). La comparaison, par microscopie optique et électronique ainsi que par électrophorèse sur gel de polyacrylamide des produits de la synthèse in vitro de protéines, montre que la technique utilisant le gradient de Percoll assure une séparation de 2-5 106 miniclules par cellule-mère, ce qui est légèrement supérieur à la méthode classique de centrifugation sur gradient de saccharose. Par contre, la faible osmolalité du Percoll comparée au saccharose et les conditions de centrifugation moins rigoureuses rendent le gradient de Percoll, en plus de rendre cette technique plus accessible, réduisent la possibilité de choc osmotique et permettent des études d'incubabilité à long terme.

Contexte

Section :
Biochimie cellulaire et moléculaire
news icon Thème du colloque :
Biochimie cellulaire et moléculaire
host icon Hôte : Université du Québec à Chicoutimi

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Titre du colloque :

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