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L’effet de la déglycosylation sur l’intégrité structurale et fonctionnelle de la céruloplasmine

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Mhamed Aouffen

Résumé de la communication

La céruloplasmine (CP) est une métalloprotéine à cuivre de 132 kDa qui possède plusieurs fonctions dans l’organisme. Oxydase (elle catalyse l’oxydation des phénols et des amines aromatiques) et ferroxydase I (elle catalyse l’oxydation du Fe2+ en Fe3+), elle présente aussi des propriétés antioxydantes importantes. Ses propriétés antioxydantes semblent s’exercer par des mécanismes diversifiés incluant l’interruption de la réaction d’Haber-Weiss par l’activité ferroxydasique, le piégeage direct du radical superoxyde et possiblement, une activité peroxydase glutathion-dépendante. Comme glycoprotéine, la CP comporte des chaînes carbohydrates liées à sa structure protéique via des liaisons N-acétylglucosamine. Parce que la contribution de ses carbohydrates dans le rôle biologique de la CP n’est pas encore clarifiée, nous avons étudié l’effet d’une déglycosylation complète de la protéine sur son intégrité structurale et fonctionnelle. La protéine a été traitée par la PNase F, une N-glycosidase, et la complétion de la réaction a été vérifiée par coloration des protéines et des carbohydrates après électrophorèse du mélange réactionnel. La déglycosylation n’altère pas l’intégrité structurale générale de la CP puisqu’elle n’affecte pas le rapport d’absorbance A610/A280 et la capacité de liaison à l’aminoéthyl-agarose. D’autre part, les activités oxydasique et ferroxydasique restent stables après le traitement. De même, les formes native et déglycosylée de la CP ont un égal pouvoir antioxydant, évalué par la capacité à piéger les espèces réactives oxygénées libérées par électrolyse du tampon Krebs-Henseleit. Les propriétés cardioprotectrices évaluées sur le cœur isolé de rat soumis à l’ischémie-reperfusion sont préservées pour la CP déglycosylée. Cependant, le temps de réponse pour l’activité antifibrillatoire de la protéine est légèrement élevé pour la forme déglycosylée. Cette différence mineure suggère que les carbohydrates pourraient être partiellement impliqués dans l’interaction de la CP avec son récepteur au niveau du cœur. Les propriétés neuroprotectrices, déterminées en cultivant des neurones P19 dans des conditions de stress oxydatif, sont parfaitement conservées pour les deux formes de la CP. La présente étude indique que la partie carbohydrate de la CP ne contribue pas de façon importante à ses activités oxydasique, antioxydante, cardioprotectrice et neuroprotectrice.

Contexte

news icon Domaine de la communication :
Biochimie, biologies cellulaire et moléculaire
host icon Hôte : Université de Montréal

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