Colloque

L'intégration du transgène au génome

Charles-André Vinette

Membre a labase

Charles-André Vinette

Résumé du colloque

La recombinaison homologue est un mécanisme utilisé dans le but d'intégrer un transgène (gène étranger à une cellule) à l'intérieur même du génome de la cellule. Cette méthode consiste à utiliser une séquence d'ADN qui est propre au génome eukaryote de la cellule, et de l'accoler d'un côté ou de chaque côté de notre transgène (gène de référence; ex Green Fluorescence Protein (GFP)). Le principe est qu'à la mitose (division cellulaire), l'ADN se réplique et c'est à ce moment-là que les séquences homologues peuvent se jumeler à l'ADN génomique linéaire et s'intégrer de façon stable dans le génome cellulaire. Le transgène sera ainsi transcrit en ARN messager, qui deviendra protéine. L'exemple avec la GFP nous permettra de vérifier si l'intégration a eu lieu par l'émission d'une fluorescence verte sous excitation aux UV. Les méthodes pour qu'un transgène s'introduise dans la cellule (dans son cytoplasme) sont multiples. On peut utiliser la microinjection, la transfection par liposomes cationiques ou par chlorure de calcium, ou encore par électroporation.