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L'intégron et la dissémination des gènes de résistance aux antibiotiques : la liaison de l'intégrase à ses sites de recombinaison

Annie Gravel
Paul Roy
Nancy Messier
AG

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Annie Gravel

Résumé du colloque

La dissémination des gènes de résistance aux antibiotiques est un problème très important de nos jours; tant du point de vue clinique que du point de vue fondamental. On connaît présentement trois mécanismes responsables de cette dissémination: les plasmides, les transposons et un plus récent, les intégrons. Les intégrons sont des éléments d'ADN mobiles constitués de deux segments conservés séparés par une région variable. Les intégrons sont distincts des autres éléments d'ADN car ils sont capables d'acquérir une grande variété de gènes de résistance aux antibiotiques sous forme de cassettes, en utilisant un système de recombinaison spécifique de site codé par les intégrons eux-mêmes. Une recombinase spécifique de site, l'intégrase, serait responsable de l'intégration et de l'excision de cassettes de résistance en interragissant avec deux sites de recombinaison (GTTPuPuPuPy): un premier localisé en 5' de chaque gène de résistance et une séquence palindromique à l'extrémité 3' de chaque gène (élément de 59pb). Nous avons cloné l'intégrase de pVS1 dans un vecteur nous permettant de la surexprimer sous forme de protéine de fusion avec la "maltose-binding protein (MBP)". Nous avons purifié cette protéine de fusion par une colonne d'affinité et utilisé pour des essais de gels de retardement et d'empreintes par interférence de méthylation afin de vérifier la liaison de l'intégrase aux sites de recombinaison. Les résultats démontrent une liaison spécifique de l'intégrase à quatre sites dans la région attI de l'intégron. Par contre, la plus forte liaison se situe au site de recombinaison, soit GTTPuPuPuPy avec des liaisons mineures en amont de cette séquence. Nous avons également détecté une liaison spécifique à l'élément de 59pb, mais cette liaison est beaucoup plus faible qu'au site attI et demeure toujours quelque peu obscure. Nous avons fait la mutagénèse de l'intégrase de pVS1 à différents acides aminés conservés dans la famille et les résultats de liaison à l'ADN sont concordants avec les expériences faites sur d'autres membres de la famille des intégrases.

Contexte

Section :
Biologie et génétique moléculaires
news icon Thème du colloque :
Biologie et génétique moléculaires
manager icon Responsables :
Louis Bernatchez
host icon Hôte : Université Laval

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Titre du colloque :

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